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(無題) 削除/引用 No.7158-6 - 2018/08/22 (水) 16:17:24 - AP >ダウンス型ホモジナイザーで組織をつぶす予定ですが、この方法だと核は壊れるでしょうか？ バッファーはPBSにプロテアーゼインヒビターを添加したものです。 手加減によります。ちゃんとやるならいい条件を見つけておく必要があるでしょう。ポッター型なんかだとクリアランス（ペッスルとガラス器の隙間）が緩めの組み合わせにしたりします。 あとMg++があると核膜が固くなっって壊れにくくなるので、核狙いのときは5 mMほどMgCl2を入れときます。

ありがとうございます 削除/引用 No.7158-5 - 2018/08/22 (水) 15:46:49 - つん APさま、おおさま ご返信ありがとうございます。 デタージェント無しでやるので、何かしらの膜フラクションはとれてきそうですね。 ＞破砕のしかたによるでしょう。 核が壊れないようにしたなら、核は回収できます。 ダウンス型ホモジナイザーで組織をつぶす予定ですが、この方法だと核は壊れるでしょうか？ バッファーはPBSにプロテアーゼインヒビターを添加したものです。 ＞もっともインタクトな核を回収するなら、数百Gで十分。余計なものが落ちないだけきれいに取れる。そうやって核（やミトコンドリア）を除いてから本チャンの超遠心にかけるというのもスマート。 この方法も検討してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.7158-4 - 2018/08/21 (火) 11:17:11 - おお デタージェントが入っていないならMicrosomeなどの膜フラクションは回収できているとおもう。ポリソームや場合によってはリボソームなどもこれぐらいなら回収できるんじゃないかと（これは必要ならちゃんと調べてください）。 デタージェントが入っていたらデタージェントに耐性の巨大分子（重合したアクチンとか）が落ちてきそうだけど。プリオンみたいな細胞内外でアグったものとかもこの程度の遠心で回収するんじゃないかな。

(無題) 削除/引用 No.7158-3 - 2018/08/21 (火) 10:26:51 - AP もっともインタクトな核を回収するなら、数百Gで十分。余計なものが落ちないだけきれいに取れる。そうやって核（やミトコンドリア）を除いてから本チャンの超遠心にかけるというのもスマート。

(無題) 削除/引用 No.7158-2 - 2018/08/21 (火) 10:03:35 - AP 破砕のしかたによるでしょう。 核が壊れないようにしたなら、核は回収できます。 そうでなくてもオルガネラ膜、細胞膜(に由来する小胞)は回収できるでしょう。膜タンパク質を濃縮するのに使う手です。

超遠心後のペレット 削除/引用 No.7158-1 - 2018/08/21 (火) 09:50:56 - つん 組織破砕サンプルを超遠心（10万Gで1時間）にかけ、不要な物を沈降させて必要な目的物を上清から回収します。 残ったペレットがもったいないので、別のアッセイに使用できないかと考えています。 10万Gで遠心した後のペレットはどんな状態なのでしょうか？ 例えば、そのペレットから核タンパクを抽出したりできますか？ 上清をとるのが一番の目的なので、超遠心をかけ終わるまでのプロトコルは変更できません。

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