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HAタグ付きのユビキチン トピック削除
No.7131-TOPIC - 2018/08/08 (水) 17:43:26 - ユビキチン
ユビキチンのコンストラクトでHAタグのついたものがありますが、これが取り込まれた蛋白質も普通にプロテアソームで分解されるのでしょうか?ユビキチン自体が小さな蛋白質なので、タグが沢山付いたポリユビキチンが通常通りにプロテアソームに認識されるのかどうか、少し疑問に思いましたのでお尋ね致します。よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.7131-3 - 2018/08/23 (木) 12:58:22 - しー
HAタグが付いたユビキチンでのユビキチン修飾からのプロテアソーム分解は可能だといわれています。論文も調べるとそれなりにヒットすると思います。

中にはGFPなど,大きめのタグを付加して解析している方もいらっしゃいます。

しかし,タグ付きユビキチンが細胞内においてネイティブなユビキチン反応を完全に模倣しているかはグレーですね。タグ付きだとポリユビキチンの数が変化しているかもしれませんし,チェインタイプも変化しているかもしれません。内在性のユビキチンとの競合もあります…

質量分析ベースでの解析や,チェインタイプ特異的な抗体が販売されていますので,これらを用いればポリユビキチン鎖の解析はある程度できるでしょう。ある程度は。

(無題) 削除/引用
No.7131-2 - 2018/08/09 (木) 03:53:01 - おお
>タグが沢山付いたポリユビキチン
内在性のユビキチンとに対してどれくらいの割合になっているかご存知でしょうか?

MG132処理したりすることも結構あると思いますけど、そういうのでタグつきのユビキチンの動向をみたりする実験はあると思いますけど、それを見てどう思いますか?

じっさいタグなしとの比較でどの程度違いが出るかは確かに興味はあります。

HAタグ付きのユビキチン 削除/引用
No.7131-1 - 2018/08/08 (水) 17:43:26 - ユビキチン
ユビキチンのコンストラクトでHAタグのついたものがありますが、これが取り込まれた蛋白質も普通にプロテアソームで分解されるのでしょうか?ユビキチン自体が小さな蛋白質なので、タグが沢山付いたポリユビキチンが通常通りにプロテアソームに認識されるのかどうか、少し疑問に思いましたのでお尋ね致します。よろしくお願い致します。

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