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(無題) 削除/引用 No.7127-4 - 2018/08/07 (火) 23:35:22 - ひろし みなさんありがとうございます よく分かりました

(無題) 削除/引用 No.7127-3 - 2018/08/07 (火) 23:19:29 - おお 最終的にSDSPAGEのWell（サンプルをのせる（いれる）ところ）にどれだけの容量、たんぱく質量をのせるかということです。 容量はWell（サンプルをのせる（いれる）ところ）からあふれたらのせられないので、自分が作った（使う）ゲルのWellにどれだけのせれるかあらかじめ把握しておいて決めればいいです。Wellに３０μl入れるとであふれ出すなら、上限２５μlほどで、それより少なくてもいいということになります。 たとえばそのサンプル３ｍｌから１０μlとり2.5μlの５xSBをくわえて全量のせたとします（TCA沈殿しないということ）。その場合あまりにもタンパク量が少なくて検出が難しいならもっとのせなければいけないでしょう。 そういう理由でサンプルを１ｍｌのせたいと思ったとき、Wellに１ｍｌのせることができません。ならば１ｍｌを１０μlにしたいと思いますよね。 １ｍｌをTCA沈殿して１０μlの溶液にすれば１ｍｌ分のせることができます。 １ｍでも少ないと思うなら３ｍｌをTCA沈殿して１０μlの溶液にすれば３ｍｌ分のせることができます（理論てきには）。 また、１ｍｌをTCA沈殿して１０μlの溶液にして全量ながすのも、３mlをTCA沈殿し、５xSB３０μlに溶解しそのうち１０μlをウエスタンに使用するのも一緒です。ただしチューブに１０μl入れたとき、チューブの横に張り付いたサンプルとかを溶かすためにチューブ全体にいきわたるようにすることが難しいと思います。くわえてチューブには微量のTCAが残っていて１０μlの５xSBでは中和しきれないかもしれません。 このような事を把握してご自身の実験ではどれだけのサンプルを用意してTCA沈殿後、どれだけの５xSBを加え、どれだけの量ウエスタンに使うか決めればいいでしょう。

(無題) 削除/引用 No.7127-2 - 2018/08/07 (火) 23:15:30 - qq >なぜ３０μlに溶解するのかわからないです。 そんな時は30ul以外のSBで溶解して何か問題がありそうか、考えてみたり、やってみられるとよろしいです。

TCA沈殿とウエスタンについて 削除/引用 No.7127-1 - 2018/08/07 (火) 22:35:52 - ひろし 学部四年で研究室に配属され、先生からプロトコルを渡されたのですが計算が苦手なのもありよくわからないところがあります。先生が夏休みに入ってしまい聞けないのでこちらで聞いてみようと思おいました。 まず、サンプル３mlをTCA沈殿し、５xSB３０μlに溶解しそのうち１０μlをウエスタンに使用することで１mlスケールになるそうなのですが　なぜ３０μlに溶解するのかわからないです。また、１０μlをウエスタンに使用するといのもピンときません。 TCA沈殿の際に何mlのSBに溶かすかというのはどのように決めているのでしょうか。 ちなみに、サンプルが２mlだったら２０μlに溶解するようです。 初歩的というかバカな質問ですが、考えても分かりません。 お願いいたします。

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