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(無題) 削除/引用 No.7122-6 - 2018/08/06 (月) 20:04:52 - おお 指摘がありますように、SDSPAGEでCBB染色したものをスキャンしてレーン全体のDensityを測定するとか、WBようにTransferしたものをPonceauなどで染色してDensityを測定するとかするのも方法かとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.7122-5 - 2018/08/06 (月) 20:00:00 - おお >CBBを使う調製方法ってあるんでしたか？ 余談ですが、Tris Tricineのバッファーシステムでは、CBBなどを使うことが多いです。BPBはこのシステムでは先端を流れないのが理由です。

(無題) 削除/引用 No.7122-4 - 2018/08/06 (月) 18:18:27 - 独り言 サンプルバッファーに入れてしまったものを、タンパク定量したいのであれば、 同量（volume)を電気泳動して、CBB染色で全部のタンパク質を染色して、染色像をスキャナーで取り込んで、全体のバンドの染色度を画像定量のがいいかと思います。

(無題) 削除/引用 No.7122-3 - 2018/08/06 (月) 18:00:58 - TS どの段階のことなのかいまいちわかりませんでしたが。 サンプルバッファーに混ぜてると、CBBではなくBPBですよね。 CBBを使う調製方法ってあるんでしたか？ ゲルに流してCBB染色したものを再定量する？？ではないですよね。 あるいはサンプルバッファーと混ぜてしまったものを再定量したいということでしょうか？ だとすると直接BCAとかは無理と思いますけど。 asanさんがおっしゃるように精製しなおすとかしか。 そのままやろうとすると、Piearceの660nm protein assayというやつが、2MEとかSDSにかなり強いのでどうでしょうかね。許容できる共存物質一覧表を確認されてはどうでしょう。 いずれの方法をとるにしても、それぞれ許容できる物質の一覧表があるので、それを見られると良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.7122-2 - 2018/08/06 (月) 16:41:21 - asan こればっかりはやってみないとわからない。 というか、すでにCBBがあるのだから、残ってるサンプルをためしに測ってみて見た目と相関してるかどうかやってみばいいとしか言いようがないですね。 ただ、普通はBCAはBradfordなんかと比べてもずれにくいので、ずれた原因がなんなのだろうか、という疑問は残りますが、、、。 どうしても貴重なサンプルだというなら、上手くいくかわかりませんが、一度アセトン沈殿等で精製し直すとか強引なやり方もあるかもしれませんけどね。

蛋白濃度調整後の濃度測定について 削除/引用 No.7122-1 - 2018/08/06 (月) 16:21:14 - TK WB用に回収したサンプルを一度BCA法で濃度測定し、濃度調整を行ったのですが、いざ流してみると蛋白濃度にサンプル間差があることが判明しました。 CBBで青色に染色されてしまっていますが、再度BCA法で測定して濃度比較することは可能でしょうか。 データシート上は銅に関与するものでなければ干渉しないみたいには書いてますが、露骨に色が付いてるので・・・

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