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(無題) 削除/引用 No.7119-5 - 2018/08/04 (土) 02:47:09 - おお ついでにｍRNAも１本鎖です。精製後RNaseさえ気をつければそこそこ保存できます。

(無題) 削除/引用 No.7119-4 - 2018/08/04 (土) 02:17:20 - おお 厳密に言うと１本鎖のほうが塩基が露出して酸化などアタックを受けやすいというのはあると思いますが、プライマーなどを５年も１０年も保存しておいたりしたらたまに劣化したものが見受けられるという程度のものかと個人的にはおもってます。 ｃDNAであればRTのときにDTTもはいっているしそう酸化的な反応が起こるとも思えませんし。

(無題) 削除/引用 No.7119-3 - 2018/08/04 (土) 02:00:34 - M２ おおさん プライマー...確かに一本鎖ですね...どこかで不安定かすると見た気がしますが、勘違いだと思います。 ありがとうございます！

(無題) 削除/引用 No.7119-2 - 2018/08/04 (土) 01:41:34 - おお プライマーは１本鎖ですけどどれほど不安定ですか？ 実際RNASE Hは二本鎖のRNAの部分にニックを入れるだけなので酵素しょりだけではcDNAを一本鎖にするには至らないでしょう。

逆転写後のRNAの除去について 削除/引用 No.7119-1 - 2018/08/04 (土) 01:09:10 - M２ RTーPCRを勉強しているものです。 まずインビトロジェンのRT酵素の説明書を見ているのですが、逆転写後、 ”The cDNA can now be used as a template for ampli cation in PCR. However, ampli cation of some PCR targets (>1 kb) may require the removal of RNA complementary to the cDNA. To remove RNA complementary to the cDNA, add 1 μL (2 units) of E. coli RNase H and incubate at 37°C for 20 minutes.” assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/mmlv_rt_man.pdf と書かれてあります。 ラボのみなさんはRNase処理はしていないみたいです。 ただ私は1.5kbを増幅したく、先輩からいただいたcDNAではPCRで増幅できなかったので、この記載を見て、ひょっとしたらRNase処理をすると増幅するのかもと期待しています。 ただ、一つ疑問なのですが、RT後には、cDNA-RNAの2本鎖になってると思うのですが、これをRNase処理するとcDNAの一本鎖となり、cDNAが不安定化するのでは？？と思いました。そうはならないのでしょうか？

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