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(無題) 削除/引用 No.7077-6 - 2018/07/13 (金) 17:13:02 - おお >polyA付加や転写終結はmRNAの核外移行などと共訳しているので、 リファレンスありますか？そこについてありそうな気がしたんですが、具体的なものを思い出せないでいたので、、、

(無題) 削除/引用 No.7077-5 - 2018/07/13 (金) 16:12:55 - xyz AP様、おお様、mon様 タンデム化、発現量低下、核外移行等々、さまざまな問題が発生するのですね。みなさま大変お詳しく勉強になります。お答えありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.7077-4 - 2018/07/13 (金) 15:35:41 - mon polyA付加メカニズムや転写終結メカニズム（配列）を解析している報告で多数同様の実験がなされています。 ただし、polyA付加や転写終結はmRNAの核外移行などと共訳しているので、レポーター遺伝子の発現（翻訳）などの効率は低いでしょう。

(無題) 削除/引用 No.7077-3 - 2018/07/13 (金) 14:55:29 - おお cDNAの前後にプロモーターとSV40 polyA Siteなどを接続したPCRフラグメントをトランスフェクションして発現させる系はあります。ただ聞くところによると発現はプラスミドほど強くないらしいです。 かわりにAストレッチを付けるという事ですが発現はある程度しそうですが、プラクティカルに使えるほどかわかりません。

(無題) 削除/引用 No.7077-2 - 2018/07/13 (金) 14:30:59 - AP フリーのDNA末端は細胞内に入ると放っては置かれないので、なにかしらあなたの予期していないことが起こる。たとえばNHEJでタンデムに重合したり。 そうなると転写方向もばらばら、転写終結配列が無いわけだからリードスルーしまくりになりそうだ。 発現があるかないかといえば、全く発現しないわけではなかろう。だいたいポリAが付いてなくても発現はするし（内在的にnon-poly A mRNAはかなりある）。

polyAなしで直鎖状二本鎖DNAからの発現 削除/引用 No.7077-1 - 2018/07/13 (金) 13:23:59 - xyz 細胞に二本鎖DNAを導入してGFPなどの遺伝子cDNAを一過的に発現させる場合、通常はcDNAの前後にプロモーターとSV40 polyAなどを接続しておきますが、これが環状ではなく直鎖状であるなら、cDNAの少し後ろにA40など付けて直後がblunt endになるようにしておけば、環状の発現ベクターと同様といわないまでもある程度の発現が期待できますか？ 末端が分解されやすいというのとは別に、そもそも正常なmRNAが転写されるのかどうかという点を疑問に思っております。

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