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(無題) 削除/引用 No.7075-5 - 2018/07/14 (土) 12:09:47 - はく mon様 tRNAについてはメーカーに問い合わせたいと思います。 ありがとうございます。 レアコドン頻度が高いタンパク質向けのキットを知っていましたら教えて頂けますと幸いです。 また、レアコドン頻度が高いタンパク質を無細胞発現したときの体験談も是非お聞きしたいです。 よろしくお願い申し上げます。

(無題) 削除/引用 No.7075-4 - 2018/07/14 (土) 12:06:28 - はく doi様 不活性型酵素は活性残基置換変異体です。 活性型酵素は野生型酵素の意味で用いていました。 わかりにくい説明で申し訳ございません。 野生型酵素は大腸菌の染色体dnaを高頻度で切断しますので、大腸菌が死んでしまい、形質転換体を得られません。 活性残基置換変異体は活性も持たないので、毒性を示さず、形質転換体を得ることができます。 また、活性残基置換変異体は可溶性画分にあり、SAX解析でも凝縮などの傾向は見られませんでした。 このことから、活性はともかく、大腸菌システムでの発現が可能なタンパク質であることがわかっています。 一方、酵母ではピキアでの野生型酵素の分泌発現を試みましたが、発現が確認できていません。

(無題) 削除/引用 No.7075-3 - 2018/07/14 (土) 11:50:37 - doi 活性型とか不活性型とはどういう状態を意味しているのでしょうか。 そもそも発現していないのか、発現はしているがアグっているのか、可溶性に発現しているけども活性がないのか、どれですか。

(無題) 削除/引用 No.7075-2 - 2018/07/13 (金) 15:27:41 - mon メーカーにレアコドンに対するtRNAの含有量を聞くしかないのでは？ 入っていなくても翻訳はできるとは思いますが、非常に効率が低いでしょうし。

無細胞発現について 削除/引用 No.7075-1 - 2018/07/13 (金) 12:08:52 - はく いつもお世話になっております。 制限酵素の研究をしています。 大腸菌でも酵母でも活性型酵素を発現出来なかったので 無細胞発現を検討しています。 不活性型酵素は大腸菌Rosetta2（de3）で発現し、確認済みです。 遺伝子中のレアコドンが1割以上あるのですが、 レアコドンが多い場合でも、販売されている無細胞発現系を使えるのでしょうか？ よろしくおねがい致します。

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