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(無題) 削除/引用 No.7018-3 - 2018/06/22 (金) 21:40:00 - レンチン VTさん ありがとうございます タイター測定に用いた細胞は、線維芽細胞です。primaryではありません。 死細胞かどうかの確認は行っていません。ウイルス濃度が高いほど デブリが多くなっていたのでもしかすると高濃度では死んだ細胞が 多く数えられているかもしれないので、PI染色で確認する予定です。 蛍光強度に関しては、希釈していないウイルス液を用いている場合では 希釈しているもので表れているGFPの蛍光強度よりも高い蛍光強度のところにも ピークが出ています。

(無題) 削除/引用 No.7018-2 - 2018/06/21 (木) 10:14:54 - VT タイター測定に用いた細胞は何でしょうか？ GFP陰性と判断されている細胞が、生細胞かどうか確認されてますか？ 希釈なしで感染した細胞のGFP intensityは、100倍希釈と比べてどうでしょう？　高くなっていれば、マルチコピーで感染していると思われます。

レンチウイルスのタイター 削除/引用 No.7018-1 - 2018/06/20 (水) 01:37:39 - レンチン お世話になります。 レンチウイルスのタイターを測定しています。 FACSの結果を基にTU/mlを計算しています。 100倍希釈のウイルス液でのGFP陽性細胞が30%という結果だけ 見ると目的のTU/mlが得られてはいるのですが、希釈無しでの GFP陽性細胞は55%程度しかいませんでした。 10倍希釈では45%です。これ以外の希釈はみていません。 100倍希釈での結果を基に考えると、希釈無しではウイルスが1細胞あたり 複数個感染する計算になるのですが、55%しかGFP陽性がいないのに そんなことはあるのでしょうか？ 先輩の引継ぎでレンチウイルスを扱うことになったのですが、先輩は タイターチェックをしたことがなく、相談できる人がおらず困っております。 宜しくお願いします。

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