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(無題) 削除/引用 No.696-8 - 2012/07/16 (月) 20:59:55 - (゜Д゜ 凍結融解は蛋白質の高次構造にダメージを与える事があるね。しないにこしたことないけど。まあ１回だけならあまり大きな問題はおきないこともあるかもしれないけど。Co-IPで結合蛋白質を探そうとかいうときはしない方がいいと思う。２回、３回とかなると完全に失活したり、なかにはかなり変性して不溶化したりと、目的によってはその後の解析に大きな支障がでることは多いね。対象とする蛋白質の性質や実験目的しだいだね。

(無題) 削除/引用 No.696-7 - 2012/07/14 (土) 18:35:14 - TH 凍結しても上手くいった事があるなら兎も角、初めてのIP実験なら凍結は避けるべきと思います。

(無題) 削除/引用 No.696-6 - 2012/07/05 (木) 18:52:59 - モモ 細胞を溶かさずに回収して凍結は比較的やられていると思います。

(無題) 削除/引用 No.696-5 - 2012/07/04 (水) 12:11:52 - TS CO-IPですか？　それなら基本的には、凍結は避けるべきだと思います。 CO-IPでないなら、実験条件によって考え方はいろいろかと。 どうしても凍結操作が避けられないという前提であれば、 凍結融解操作で目的タンパク質が不溶化したりしないかどうかが 重要かと思います。 変性条件で抽出していて、たとえば、回収、凍結、融解、加熱、遠心、IPというふうにできれば、比較的安全かと私は思います。 非変性条件だと、凍結、融解で目的タンパク質が変性不溶化しないことが条件ではないかなと。実験の定量性をどこまで要求するかにもよりますが。 もちろん、いずれにしても凍結を避けるのが最も安全、ベストであることは間違いありません。

(無題) 削除/引用 No.696-4 - 2012/07/03 (火) 21:50:39 - ？？？ 私も、凍結は避けますね。どうしてもやりたいなら、凍結プラス、マイナスできちんと試してみないといけませんよ。 まあ、結合様式などにもよるので、、、周りにもチェック。

(無題) 削除/引用 No.696-3 - 2012/07/03 (火) 18:00:58 - KY 細胞をＰＢＳwashしてdishのまま凍結している人は結構いると思うけど（シグナル伝達をすぐに止めるため）。 そのまま保存もできる。 その後にＩＰできるかどうかは、僕は普段行っていないのでわかりません。

(無題) 削除/引用 No.696-2 - 2012/07/03 (火) 15:19:30 - aaaa できることなら凍結しない。 どうしても凍結したいなら、遠心後の上清。

免疫沈降 削除/引用 No.696-1 - 2012/07/03 (火) 10:01:25 - りり お世話になります。 培養細胞に遺伝子導入して、サンプルを回収し免疫沈降してうウエスタンブロット解析をしています。 サンプルを回収した時点で一度凍結保存し、後日免疫沈降しようと考えています。培養細胞にLysisバッファーを加えて回収したあと、スクレイパーで細胞を剥がし30分間Lysisバッファーとともに撹拌させたのち、上清とペレットに遠沈しているのですが、どの段階で凍結させるのが適切かご教示お願いいたします。

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