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(無題) 削除/引用 No.6923-3 - 2018/05/18 (金) 10:11:29 - み >[Re:2] 774さんは書きました : > バッファーの量を1mlにこだわらず、減らせばいいのでは？ > 6wellなら200ulあればいけるでしょう。 > どれくらい濃縮しないといけないレベルなのかわかりませんが。 あるいはPBS中でスクレーパーで回収、遠心後のペレットを材料にすればさらにvolumeは減らせる。 しかし減らしすぎると抽出効率が落ちる危険性はある。 １レーンにロードできる蛋白量は限られるだろうし、細胞分画でenrichするか、良い抗体があるなら普通のbuffer volumeで抽出して免疫沈降で目的蛋白を濃縮するかな。

(無題) 削除/引用 No.6923-2 - 2018/05/18 (金) 09:49:47 - 774 バッファーの量を1mlにこだわらず、減らせばいいのでは？ 6wellなら200ulあればいけるでしょう。 どれくらい濃縮しないといけないレベルなのかわかりませんが。

一瞬で細胞を変性条件で溶かしたい。 削除/引用 No.6923-1 - 2018/05/18 (金) 08:26:39 - こりまり 6-ウェルディッシュがあり、それを一瞬で細胞を破壊し、溶かしたいです。 目的はウエスタンです。 10％TCAを1ml加えるというのはどうでしょうか？ その後そのままTCA沈殿させ、タンパク質を濃縮してはどうかと考えています。 避けたいのは非イオン性界面活性剤の1％TritonX100で可溶化は避けたいです。 一瞬で細胞／タンパク質を変性させ、プロテアーゼの働きを瞬時に止めたい理由があるからです。 SDSサンプルバッファーを1ml加えるというのもあるのですが、濃縮しないと見えないタンパク質だと思うので、10％TCAを考えています。

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