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細胞けん濁液の作り方 トピック削除
No.6843-TOPIC - 2018/04/13 (金) 17:56:03 - KM
マウスに癌細胞株を移植する実験を行うことになりました。
論文などを見ると、かなりの数の細胞を50-100µlくらいの少ない液量にけん濁して注射しているようなのですが、実際にやられている方々は細胞の希釈をどういうふうに行っているのでしょうか?
細胞の濃度を高くすると細胞自体の体積が無視できないほどになるので、例えば50µlに目的の数の細胞が含まれるようにしようとすると、細胞だけでそれぐらいの容量になってしまいそうな気がしますし、どうやって正確な濃度のけん濁液を作られているのでしょうか?
よろしくお願いします。
 
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No.6843-10 - 2018/04/14 (土) 01:17:58 - N
お気持ちはわかります。細胞数が多いと遠心したあとの細胞の塊が大きい気がしますよね。私はカウント後の遠心を強め(長め)にしてできるだけ上澄みを取ってその細胞の塊の体積は無視してけん濁します。大事なのは等量(同じ数)の細胞を接種させることと考えます。

(無題) 削除/引用
No.6843-9 - 2018/04/13 (金) 19:11:29 - KM
ttp://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0165994

たとえば、上の論文だと1x10^6/ulにしてるみたいなんですが、ふつうにやればできるのでしょうか、、?

(無題) 削除/引用
No.6843-8 - 2018/04/13 (金) 18:50:29 - KM
10^5程度ならばいけると思うのですが、10^7くらいになると細胞だけで50ulくらいになりませんか、、、?

(無題) 削除/引用
No.6843-7 - 2018/04/13 (金) 18:38:04 - R
普通に希釈するとまずいですか?

細胞懸濁液の濃度測定して、v/vで希釈。
細胞懸濁液50 uL中に10^5 cells等の条件が揃えばいいのでは。

懸濁液ではない状態で濃度を測定しているのですか?

(無題) 削除/引用
No.6843-6 - 2018/04/13 (金) 18:33:33 - xyz
動画の8:14辺りからトリプシンで剥がして遠心して50ulのメディウムに1×10^6個の細胞を懸濁して注射してますが、一体どれほどの量の細胞を懸濁したいのですか?

(無題) 削除/引用
No.6843-3 - 2018/04/13 (金) 18:22:21 - KM
すみません、文字化けしているところはマイクロリッターです。

xyzさん
ありがとうございます。
関係ありそうなところを少し読んでみたんですが、他の論文と同じようにふつうに希釈してるだけのように読めるんですが、、、
後でちゃんと読んでみます。

(無題) 削除/引用
No.6843-2 - 2018/04/13 (金) 18:11:02 - xyz
筋衛星細胞の単離、培養、および移植
https://www.jove.com/video/50846/?language=Japanese

細胞けん濁液の作り方 削除/引用
No.6843-1 - 2018/04/13 (金) 17:56:03 - KM
マウスに癌細胞株を移植する実験を行うことになりました。
論文などを見ると、かなりの数の細胞を50-100µlくらいの少ない液量にけん濁して注射しているようなのですが、実際にやられている方々は細胞の希釈をどういうふうに行っているのでしょうか?
細胞の濃度を高くすると細胞自体の体積が無視できないほどになるので、例えば50µlに目的の数の細胞が含まれるようにしようとすると、細胞だけでそれぐらいの容量になってしまいそうな気がしますし、どうやって正確な濃度のけん濁液を作られているのでしょうか?
よろしくお願いします。

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