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エピ免疫染色の初歩的なこと(焦点を動かしても良いか) トピック削除
No.6834-TOPIC - 2018/04/11 (水) 03:53:11 - とみー
Epifluorescence microscopeで、ミトコンドリアとゴルジ体と核を染めています。

ミトコンドリア(緑)にフォーカスを合わせ、画像取得し、その後、ゴルジ体(赤)に切り替えると微妙にフォーカスがずれています。この時、フォーカスをゴルジ体に合わせて、画像取得し、赤と緑をマージさせても良いのでしょうか?

今後、ミトコンドリアとゴルジ体を行き来するタンパク質をさらに染色する予定で、ゆくゆくはコンフォーカルで行わないといけないとは思いますが。(論文時に必須ですか?)

というわけでえ2つお聞きしたいのは、

1. エピで画像取得する際、それぞれのフィルターでフォーカスを合わせても良いのかどうか

2. 共局在を示す際、コンフォーカルは必須でしょうか?個人的に、エピの方が綺麗で鮮明な画像が取得されるんですよね。。。
 
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(無題) 削除/引用
No.6834-3 - 2018/04/11 (水) 10:57:47 - mon
本質を外している質問ですよね。。
1.水平方向の位置関係を示すなら問題ないでしょう。焦点がずれていることは論文に記載すれば良いです。
2.コンフォーカルを使ったからと言って、共局在を完全に証明できるわけではありません。限りなく近いところにある(多い)、というだけです。他の方法での裏付けが必要です。

(無題) 削除/引用
No.6834-2 - 2018/04/11 (水) 10:25:38 - AA
3D stack画像を取ればよいのではないでしょうか?

エピ免疫染色の初歩的なこと(焦点を動かしても良いか) 削除/引用
No.6834-1 - 2018/04/11 (水) 03:53:11 - とみー
Epifluorescence microscopeで、ミトコンドリアとゴルジ体と核を染めています。

ミトコンドリア(緑)にフォーカスを合わせ、画像取得し、その後、ゴルジ体(赤)に切り替えると微妙にフォーカスがずれています。この時、フォーカスをゴルジ体に合わせて、画像取得し、赤と緑をマージさせても良いのでしょうか?

今後、ミトコンドリアとゴルジ体を行き来するタンパク質をさらに染色する予定で、ゆくゆくはコンフォーカルで行わないといけないとは思いますが。(論文時に必須ですか?)

というわけでえ2つお聞きしたいのは、

1. エピで画像取得する際、それぞれのフィルターでフォーカスを合わせても良いのかどうか

2. 共局在を示す際、コンフォーカルは必須でしょうか?個人的に、エピの方が綺麗で鮮明な画像が取得されるんですよね。。。

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