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(無題) 削除/引用 No.6824-3 - 2018/04/08 (日) 18:59:33 - tracker ビオチン化抗体をフリーのビオチンから精製するという意味ならアビジンでは無理でしょう。 ANOさんの仰るように脱塩用のゲルろ過などがコスト的にもベストかと。

(無題) 削除/引用 No.6824-2 - 2018/04/08 (日) 10:51:56 - ANO その精製キットを使ったこともないし、原理も判りませんが、ビオチンアビジンの結合は強く早いからこそ、ウエスタンの段階では、ビオチン全てのアビジンがついていて使えないないということは無いですか？ ちなみに２０年以上、標識後の抗体の精製にはディスポのゲル濾過（NAP５とか）を使ってます。他の人は、スピンカラムもつかってることが多いと思います。

ビオチン化抗体が精製できないです。 削除/引用 No.6824-1 - 2018/04/08 (日) 07:08:13 - ビオチン Fab抗体をキットを使ってビオチン化しました。 ビオチン化されたものを選択的に回収するため、NEBのMagnetic streptavidin beadsを購入し、そのうち50 ul suspended beadsをサンプルに加え入れ、4度、1時間プルダウンしました。 残念ながら、ウエスタンでHRP-streptavidinで調べたところ、全くビーズに結合していないことがわかりました。ほぼアンバウンドフラクションにバンドが認められました。 ビーズの説明書を今一度見ると、4度ではオーバーナイトの反応が必要で、室温では1時間で良いと書かれてあります。ただビオチンアビジンの結合は強く早いはずだと思うので、1時間4度ではいけないのかどうなのか悩んでいます。 サンプルの関係で、4度でどうしてもビーズと反応させたいです。 このビーズはビオチン化核酸のための精製ビーズでしょうか？タンパク質のプルダウンに使えるのか怪しくなってきました。(NEB #S1420S)

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