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(無題) 削除/引用 No.6743-3 - 2018/03/06 (火) 02:55:40 - おお コンフォーカルか普通の蛍光顕微鏡かでも見え方も違うと思うけど、どっち？

(無題) 削除/引用 No.6743-2 - 2018/03/06 (火) 02:18:11 - 顕微鏡 観察時のフォーカスする位置が細胞に対して高かったり低かったりすると細胞表面のカドヘリンがあたかも細胞の中、細胞質に染まって見えてたりしませんでしょうか。うまいこと細胞の真ん中を切るようなところでピントを合わせるとどうでしょう。

E-カドヘリン染色の条件検討について 削除/引用 No.6743-1 - 2018/03/06 (火) 02:05:41 - カドヘリン A549細胞を使ってE-cadherinの染色を行なっているのですが、細胞膜に沿って染まるような実験結果が得られず困っています。染まって入るものの、細胞室が染まっている感じです。 実験のプロトコールは以下になります。 4%PFA 30分 室温で固定 PBS wash 3分 x 3 0.5% TritonX-100 10分 室温 E-カドヘリン抗体（100倍希釈、BD）オーバーナイト 4℃ PBS wash 3分 x 3 ファロイジン（400倍、sigma）+ 2次抗体Alexa-488（300倍、Invitrogen） PBS wash 3分 x 3 マウンティング（DAPI含有） 観察 条件検討が必要だとしたら、固定条件なのでしょうか？ 抗体は結構濃いと思うのですが。 ご経験のある方よろしくお願いします。

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