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(無題) 削除/引用 No.6665-13 - 2018/02/10 (土) 09:56:55 - おお >NMRでの構造解析にやむを得ない事情 You need to label your proteins with stable isotopes, do you.

(無題) 削除/引用 No.6665-12 - 2018/02/10 (土) 07:59:14 - Comp おおさん、 はい、私の遺伝型を最初には確認しています。 ですが、リサーチゲート？の書き込みにあったように、遺伝型に関わらず、Thyamineを入れると良い、みたいなことが書かれてありました。 > You never know. But sometimes, you have no choice when you analyze structures by NMR. 後学のために、NMRでの構造解析にやむを得ない事情があるというのはどういった場合ですか？ 質問に質問を重ねてしまい恐縮です。

(無題) 削除/引用 No.6665-11 - 2018/02/10 (土) 07:57:02 - Comp 中年さん、 なるほど！栄養学的にポアーなもので培養するというのが可溶性分画に発現させるための手段だったのですね。 > まずはrichな培地で試してみて、上手くいかない場合にいろいろ工夫するということでしょうね。 たとえば今回のSoluBL21のタンパク質誘導時に、推奨M8培地でうまくいかなければ、通常のLBで誘導してみるというのも手でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.6665-10 - 2018/02/09 (金) 18:59:40 - おお >Thyamineがキーなんでしょうか。 really? SoluBL21™ Strain: F-ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) >タンパク質発現にそのminimumで本当によいのか？ You never know. But sometimes, you have no choice when you analyze structures by NMR.

(無題) 削除/引用 No.6665-9 - 2018/02/09 (金) 15:14:00 - 中年 組換えタンパク質を発現しようとしたとき、大半が不溶性画分（封入体）に行ってしまって収率が低くなってしまうことがしばしばありますが、そういう場合に翻訳のスピードを落としてフォールディングを促す手段として試してみるオプションとして、低温で培養することや栄養がpoorな培地で培養することがあります。 まずはrichな培地で試してみて、上手くいかない場合にいろいろ工夫するということでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.6665-8 - 2018/02/09 (金) 14:04:14 - Comp monさんありがとうございます。 そうなんですよね。これもみてました。 Thyamineがキーなんでしょうか。 確かにyeast extractやTryptonに比べ、defined mediaの方は本当にminimumなものしか入っていませんもんね。タンパク質発現にそのminimumで本当によいのか？栄養学的にむしろrichな方がいいのではないか？と思ってしまいます。ただむやみやたらに入れるとフィードバックがかかる気もしますし、こういうpostを見て、プレ実験をしっかりした方がいいですね。

(無題) 削除/引用 No.6665-7 - 2018/02/09 (金) 13:36:59 - mon www.researchgate.net/post/Why_is_recombinant_Ecoli_not_growing_in_M9_minimal_media

(無題) 削除/引用 No.6665-6 - 2018/02/09 (金) 09:27:08 - Comp BTW, I was super-surprised to see that during protein expression, yeast extract and Trypton are not required. Just synthetic media (M9) is sufficient. Have you used this strain before for your protein induction? As I saw a few posting that SoluBL21 did not grows and produces proteins in M8 media when it was switched from LB media during protein induction. So I am wondering if LB media is for bacterial growth. But M8 (w/o constituents of LB) media is sufficient for production of protein but not for growth. Is it right? Thanks in advance.

(無題) 削除/引用 No.6665-5 - 2018/02/09 (金) 09:22:15 - Comp Got it. Thanks Oh-san!

(無題) 削除/引用 No.6665-4 - 2018/02/09 (金) 09:15:31 - おお Low competency does not matter as long as you have a sufficient amount of intact plasmids.

(無題) 削除/引用 No.6665-3 - 2018/02/09 (金) 07:33:33 - 学生 Thanks so much Oh-san, The purpose for use of BL21 and SoluBL21 is to transform an already constructed plasmid, so I think low competency does not matter unless I use these for cloning I think. What do you think? I mean even it is low competency, that is okey to have just only one colony from these for protein expression. Anyway, I got a peace of mind to hear supportive comment on this. I appreciate it. >[Re:2] おおさんは書きました : > yes, but the competency might not be as high as DH5α.

(無題) 削除/引用 No.6665-2 - 2018/02/09 (金) 06:02:48 - おお yes, but the competency might not be as high as DH5α.

コンピテントセルの自作について。 削除/引用 No.6665-1 - 2018/02/09 (金) 04:09:53 - Comp 質問させてください。 これまで、DH5αに関してはルーチンに井上法によりコンピテントセルを作ってきました。 この度、ラボの在庫のBL21や、Genlantisというところから新たに購入したSoluBL21 (DE3) のコンピテントセルも自作できればと考えていますが、これも井上法で自作可能なのでしょうか？ ご存知でしたら教えてください、お願いします。

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