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(無題) 削除/引用 No.6630-5 - 2018/01/29 (月) 08:46:39 - おお >一般的な疑問として、Fc融合タンパク質を作らせるベクターは高発現を持つものが使われるべきだと思うのですが、 この手のことの一般論はわたしはわかりかねますが、２９３でも（Tがなくても）、CMVやCAGでトランジェントに発現させると細胞内でCBB染色で確認できるほどの蛋白が見れることがあります（すべてではありません）。なので２９３TでもSV40oriがないベクターでもかなり高発現が期待できる場合もあると思います。 また高発現といってもあまりにも強すぎると特に分泌系や膜に行くものは小胞体にストレスがかかり思ったより発現が高くならないか、細胞が調子悪くなってしまうという話も聞きます。 加えてSV40oriを含まないプラスミドのほうが、Tアンティゲンが入っている細胞に対してはいい安定導入株が作りやすいというメリットもあります。

(無題) 削除/引用 No.6630-4 - 2018/01/29 (月) 05:07:13 - あ 1) 一定量のプラスミドが細胞内に存在する場合、それ以上プラスミドが存在しても、収量が上がらずにプラトーになる。 2) その「一定量の細胞内プラスミド濃度」は、単純にDNA/トランスフェクション試薬コンプレックス濃度を高めることで達成可能である。 みたいな論文を見たことが有ります。どこでだったかは忘れてしまいましたが。

(無題) 削除/引用 No.6630-3 - 2018/01/29 (月) 03:32:52 - 初学者 おおさん、ありがとうございます。 私もシークエンスから該当する配列がないことは確認していました。 やはりなさそうです。 一般的な疑問として、Fc融合タンパク質を作らせるベクターは高発現を持つものが使われるべきだと思うのですが、そうなると、293TとSV40oriの組み合わせは最適だと思うのですが、なぜこのベクターはそういった工夫がされていないんでしょうかね。 あるいはそれをもっていなくても、高発現が期待できるんでしょうか。 今一応トランスフェクションして数日後にサップを回収して解析する予定でいます。

(無題) 削除/引用 No.6630-2 - 2018/01/28 (日) 18:10:13 - おお マップ見たけどSV40oriはみあたらないねぇ。。。一応問い合わせてみたら？

293TとSV40oriの組み合わせ 削除/引用 No.6630-1 - 2018/01/28 (日) 15:18:30 - 初学者 お世話になります。 293TとSV40oriを持つプラスミドの組み合わせはプラスミドの増幅が293T内で起こるため、高発現が期待できると思います。 今わたしはinvivogen社のpFUSE-hIgG2-Fc2を使おうとしていますが、これにはそういった効果は期待できないと思うのですが、そのような理解で正しいでしょうか？

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