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(無題) 削除/引用 No.6629-4 - 2018/01/29 (月) 13:41:13 - １q２w３え４t６y７８９ 使用目的がWBとほぼ決まっているならば、SDS-sample bufferで−８０Cがいいと思います。還元剤無しで保存して、還元剤は使用時に入れた方がいいです。−２０Cでもいいのかもしれないですが、長期だと酸化とかで還元剤の効果が落ちてきて蛋白質のSH基が変な風に再酸化が起きて泳動パタンが高分子量領域が特にスメアっぽくなることがあったのでどうかなとおもいます。（還元剤追加したら元に戻りました） RIPAだと（SDS入でもその濃度がかなり低い）変性作用が弱いので酵素活性とか活性がけっこう残存することがあるのでproteinase inhibitorで−８０C keep　＆凍結融解は極力しない、など保存には十分な注意が必要と思います。

(無題) 削除/引用 No.6629-3 - 2018/01/28 (日) 17:55:47 - おお 変性した状態でいいのなら私はHot lysis bufferを使ってます。サンプルバッファーは蛋白定量で難がありますので。Hot lysis bufferもサンプルバッファーと同様でゲノムも溶出されたりして使いづらいこともあります。そういうのを避けたい場合はマイルドなLysis bufferで抽出してすぐに１％になるようにSDSを加えてボイルしてから保存してます。 保存はー８０度のほうが安心ですが、２、３日で使うならー２０度においています。大抵の蛋白はー２０度で長期的にOKみたいですが、日を追うごとに検出しづらくなる蛋白もあるなぁという感触です。

(無題) 削除/引用 No.6629-2 - 2018/01/28 (日) 13:40:48 - mon RIPA buffer中ではタンパク分解酵素が働くので、-80℃保存は必須です。 SDSサンプルbufferを加えれば、大抵のタンパクは室温でも安定です。 ただしProteinase KのようなSDS中でも分解できる酵素もありますので、サンプルによっては注意が必要です。

ウェスタン用タンパク質の保存 削除/引用 No.6629-1 - 2018/01/28 (日) 10:16:26 - たけ いつもお世話になっています。 ウェスタン用のタンパク質サンプルを保存したいのですが、みなさんは、RIPA bufferに溶けた状態で保存しているのでしょうか。またはサンプルバッファーまで加えた状態で保存しているのでしょうか。また、その際の保存温度は-80℃にしていますか？ よろしくお願いします。

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