BioTechnicalフォーラム [マウス卵巣組織の凍結切片について]

マウス卵巣組織の凍結切片について

No.6628-TOPIC - 2018/01/28 (日) 09:54:33 - ゆき

マウス卵巣組織をHE染色したいのですが、うちのラボにはクライオスタットがあり、ミクロトームがありません。
そのため、凍結切片を作って染色しようと思うのですが、論文ではパラフィン切片の手法ばかり使われています。
凍結切片からHE染色するのは難しいのでしょうか？
試しに卵巣組織を4% PFA固定した後に凍結切片を作ってみたのですが、卵巣組織が壊れてしまい、きれいな標本はできませんでした。
私が凍結切片に慣れてないので技術的なトラブルの可能性は大いにあるのですが、技術的に凍結切片からHE染色は可能でしょうか？？
　

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No.6628-10 - 2018/01/29 (月) 14:09:02 - AP

昔は普通のパラフィン用ミクロトームを冷凍庫に入れたり冷凍室内で作業したりして凍結切片を作っていたものさ、、、、、、、
逆も可だろうが、共用のクライオスタットなら他の人が嫌がるかもね。

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No.6628-9 - 2018/01/29 (月) 13:56:44 - １q２w３え４t６y７８９

凍結切片のHE染色、ふつうにやってます。脾臓とか筋系とか比較的硬い組織ならばパラフィン切片と区別付かないくらいきれいにできます。しかし脳とか肝臓とかの柔らかい組織の凍結切片は普通の方法ではきれいな標本を得るのはなかなか難しい（すだれ状に一方向に切片が割れたり崩れたりする）です。残念ですが技術の向段階的なシュークロース置換処理とかしてそれから切るとかなり改善されるとは聞きます。

パラフィン切片は設備ないなら専門業者に有料で委託もできますよ。プロが角度とか部位とかの要望を聞いて作ってくれます。最近はそうする人の方が多いのではないでしょうか。

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No.6628-8 - 2018/01/29 (月) 09:16:09 - ゆき

いろいろとご意見ありがとうございます。
もちろん、凍結で切片が破壊されている可能性も考えられると思います。
やはりパラフィンの方が形態を維持しやすいですよね。

おお様がおっしゃってる、クライオスタットでパラフィン切片を作ってる人はおられるのでしょうか？
それができるのならうちでもパラフィン切片を作れそうです　笑

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No.6628-7 - 2018/01/28 (日) 18:07:16 - おお

ちょっとお馬鹿な質問かもしれませんが、クライオスタットでパラフィン切片切れない？

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No.6628-6 - 2018/01/28 (日) 18:05:16 - おお

>形態はパラフィン切片の方が保持されやすい
確かに一般的にはそうでしょうね。

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No.6628-5 - 2018/01/28 (日) 18:03:21 - おお

検体が貴重なものであり、多角的な手法に対応できるように固定せず凍結して保存するということはあると思います。そういう組織はあるときはHEなど染色に使い、電顕にも使ったり、スライスしてWB、DNAシーケンス、RNAもとるかな、、まあ幅広い対応ができますので。

凍結で組織が壊れないように急速に凍結するよう工夫がいくらかあるようですが、凍結で組織が壊れている可能性はないですか？

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No.6628-4 - 2018/01/28 (日) 17:06:06 - のま

HEは基本的には形態を見るものです。そしてその形態はパラフィン切片の方が保持されやすいと思います。

凍結を使わない理由はそこだと思いますが、やらないことはないですね。ただどうしてパラフィンでやらないの？という質問は来るとは思います。

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No.6628-3 - 2018/01/28 (日) 16:53:09 - ゆき

APさん、ありがとうございます。

論文を見てるとパラフィン切片の写真しか見たことがなかったので、凍結よりもパラフィンの方が染色がきれいなのかなと思ってしまいました。
このあたりは知識が少ないため、すみません。
凍結でもHE染色はできるのですね、安心しました。

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No.6628-2 - 2018/01/28 (日) 11:21:14 - AP

もちろん凍結切片だってHE染色できますよ。
できないかもって思う理由は何かな？