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(無題) 削除/引用 No.6606-7 - 2018/01/22 (月) 11:50:59 - MK AP様、ありがとうございます。 アセトン沈殿、風乾後はサンプルバッファーを加えて、ソニケーションが必要でした。

(無題) 削除/引用 No.6606-6 - 2018/01/22 (月) 11:39:14 - AP よかったですね。 フィードバックありがとうございます

(無題) 削除/引用 No.6606-5 - 2018/01/22 (月) 10:27:51 - MK AP様、 昨日、難容性の塩を形成させてしまったのち、10％TCA、氷上、30分後、20000gで10分遠心し、冷アセトンでリンスしたものをSDSサンプルバッファーで可溶化させてみたところ、綺麗に今泳動され、ポンソーでそまってくれました！！ありがとうございます。以後、気をつけます。 >[Re:4] APさんは書きました : > サンプルバッファーを加える前にやるべきということです。 > いったん析出してしまったものに対して有効かどうかは分かりかねます。 > 難溶性であっても大容量の透析液にたいして透析すれば抜けるかなあ >

(無題) 削除/引用 No.6606-4 - 2018/01/21 (日) 15:32:46 - AP サンプルバッファーを加える前にやるべきということです。 いったん析出してしまったものに対して有効かどうかは分かりかねます。 難溶性であっても大容量の透析液にたいして透析すれば抜けるかなあ

(無題) 削除/引用 No.6606-3 - 2018/01/21 (日) 12:12:44 - MK AP様、早速コメントありがとうございます。 そうだったのですね。恥ずかしながら知りませんでした。 ＞一旦、アセトン沈殿、TCA沈殿などで沈殿として、サンプルバッファに懸濁してボイルしたらどうでしょう。サンプルバッファーで加熱すればたいていのタンパク質は溶けます。 とても貴重なサンプルでしたが、すでにサンプルバッファーを加えて難溶性の塩を形成させてしまったものをTCA沈殿でレスキュー可能ということでしょうか？ でしたら約10％ TCAを加えてみようかと思います。 その後アセトン洗浄ですよね？ もしレスキュー可能でしたらとても救われます。。

(無題) 削除/引用 No.6606-2 - 2018/01/21 (日) 12:01:32 - AP グアニジンとドデシル硫酸は難溶性の塩を作ります。 一旦、アセトン沈殿、TCA沈殿などで沈殿として、サンプルバッファに懸濁してボイルしたらどうでしょう。サンプルバッファーで加熱すればたいていのタンパク質は溶けます。 あるいは透析でグアニジンを尿素に置換するとか。

6Mグアニジン塩酸で抽出した蛋白質抽出物をウエスタン 削除/引用 No.6606-1 - 2018/01/21 (日) 11:44:07 - MK 非常に硬い生物を6Mグアニジン塩酸でなんとか溶かしました。 このサンプルをSDS-PAGEしたいのですが、6xSDSサンプルバッファーを加えると沈殿というか不溶性のものができました。 ひょっとして？と思い、未使用の6Mグアニジン塩酸に同様に加えてみても同じように不溶性のものができました。これはなんでしょうか？ボイルをしても消えませんでした。 グアニジンで溶かしたものをSDS-PAGEするには透析などでグアニジンを除かないといけないのでしょうか？ すみませんがご教示いただけますと幸いです。

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