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クリスタルバイオレット染色時の固定について トピック削除
No.6587-TOPIC - 2018/01/16 (火) 13:23:46 - ちくわ
トランズウェルアッセイで細胞の浸潤能を計測しようと思い文献でプロトコル等を調べていたところ、クリスタルバイオレットで細胞の染色を行い細胞数をカウントしている論文がありました。

その論文では染色の前にまず細胞を固定化していたのですが、3.7%ホルムアルデヒドで5分処理した後、無水メタノールで10分間インキュベーションを行い、その後クリスタルバイオレットを反応させていました。

固定を行うだけであれば3.7%ホルムアルデヒドだけで十分だと思うのですが、この無水メタノールの処理にはどのような意味があるのでしょうか。
また、この過程は飛ばしてしまっても大丈夫でしょうか。
 
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No.6587-5 - 2018/01/24 (水) 16:29:17 - AP
脱水のことはわからん。
たとえば膜を比較的通りやすいと言われているDAPIでも、固定しただけだととても染まりが悪い。何かしらの透過処理をした方がいい。
そのクリスタルバイオレット染色プロトコールもそういうことなんじゃないかと。透過処理は界面活性剤でもいいかもしれないが、アルコールやアセトン処理で透過化する方法だって珍しくないだろう。

(無題) 削除/引用
No.6587-4 - 2018/01/22 (月) 10:09:34 - ちくわ
ありがとうございます。
脱水を兼ねた透過処理ということで界面活性剤ではなくメタノールを使用しているという認識でよいのでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.6587-3 - 2018/01/19 (金) 12:51:18 - AP
たぶん膜の透過処理

(無題) 削除/引用
No.6587-2 - 2018/01/19 (金) 10:22:36 - あ
脱水では?

クリスタルバイオレット染色時の固定について 削除/引用
No.6587-1 - 2018/01/16 (火) 13:23:46 - ちくわ
トランズウェルアッセイで細胞の浸潤能を計測しようと思い文献でプロトコル等を調べていたところ、クリスタルバイオレットで細胞の染色を行い細胞数をカウントしている論文がありました。

その論文では染色の前にまず細胞を固定化していたのですが、3.7%ホルムアルデヒドで5分処理した後、無水メタノールで10分間インキュベーションを行い、その後クリスタルバイオレットを反応させていました。

固定を行うだけであれば3.7%ホルムアルデヒドだけで十分だと思うのですが、この無水メタノールの処理にはどのような意味があるのでしょうか。
また、この過程は飛ばしてしまっても大丈夫でしょうか。

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