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(無題) 削除/引用 No.6561-5 - 2018/01/06 (土) 16:25:45 - agg ＞monさん、ありがとうございます。 菌の繁殖なら毎度調製しなくて済みそうですね。 カラムの都合上EDTAを加えることができないのでA/Cか保存温度を変えてやってみます。B bufferのイミダゾールは500 mMで入っているのでそのせいかも知れないですね。 すっきりしました。ありがとうございます！

(無題) 削除/引用 No.6561-4 - 2018/01/06 (土) 16:13:04 - mon 「新しいデュラン瓶」って滅菌していないのですよね。 濾過滅菌した液体でも未滅菌ボトルにいれれば、何か生えますよ。 EDTA等が入っていれば増殖抑制効果がありますけど。 イミダゾールを入れた方は、（どれくらいの濃度か不明ですが）浸透圧が高すぎて生えないのでしょう。0.5M NaCl（1 OsM)程度のなると酵母でも滅多に生えないようです。

(無題) 削除/引用 No.6561-3 - 2018/01/06 (土) 15:58:47 - agg ＞おおさん、ありがとうございます。 緩衝液はニトロセルロース膜で吸引ろ過したものを新しいデュラン瓶、室温で保存しています。 前回もAの緩衝液だけ沈殿物が見られたので作り直していました。 何かが結晶化したのかと思い、温度をあげたのですが溶けなかったです。 結晶物ではないとすれば、菌のほうが可能性高そうですかね...？

(無題) 削除/引用 No.6561-2 - 2018/01/06 (土) 15:46:45 - おお 沈殿するような組成ではないですね。。。グリセロールが炭素源になりうるのでなんか生えたんじゃない？保存温度は？

精製緩衝液の沈殿物の原因は・・・ 削除/引用 No.6561-1 - 2018/01/06 (土) 14:36:44 - agg いつも参考にしています。 現在、異種発現酵素の精製をおこなっています。 精製にHistag精製をおこなっているのですが、緩衝液に沈殿物が生じてしまいます。 即時調整じゃないとだめなのでしょうか・・・。 以下組成(A) 25 mM Tris-HCl 300 mM NaCl 5% グリセロール イミダゾールを加えた(B)の緩衝液には沈殿物が出ません。 お力添えお願いします。

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