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non-RI ノザンブロットキットのおすすめを教えて下さい トピック削除
No.6560-TOPIC - 2018/01/06 (土) 10:54:29 - ノザン
よろしくお願いします。

10数年ぶりにノザンブロットを行うことになりました。その当時はRIを使ってノザンをしていたのですが、今のラボではRIの使用が出来ないので、non-RIでのノザンブロットを検討しています。

RocheのDIG Northern Starter Kitなるものでも買えば楽にいけるかな?と思ってネットで見ていたのですが、ThermoFisherからNorthernMax Kitなるものが売られていたり、non-RIのノザンキットも色々存在するようです。

そこで、non-RIでのノザンを実際に行われている方、お勧めのキットを教えて頂けないでしょうか?

使用するのはマウスの組織から抽出したRNAです。このRNAから合成したcDNAに対してPCRを行い、目的の遺伝子(の一部)が発現していることは確認済みです。ノザンを行って、全長約1.5kbpのバンドを見ることが目的です。PCRの結果、発現量は(なにを基準にそう言うのかとお叱りをうけそうですが)そう高くはないが、nested PCRにしないと検出が出来ないような極微量の発現というものでもありません。

値段は考えなくていい、簡便さとスピードだけ考えろ、とはボスの弁です。なので少々高くついてもかまいません(しかしノザン自体のアウトソーシングでは駄目とのこと)。よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.6560-4 - 2018/01/13 (土) 07:02:07 - ノザン
>APさん

ありがとうございます。Rocheのキット注文しました。

>あたらしい製品でなにか画期的なイノヴェーションとか性能の向上とかあったという話を聞いたことがない。

123さんのような考え方をされる方も入る位だから、ノザンキットなんかはあまり売れてなくて商品開発にも金がかかってないんでしょうかね?まあ、自分も10数年ぶりにやる位だし。

>もちろんpoly A精製はするんでしょな?
完全に失念しておりました。やることにします。ありがとうございます。


>123さん
結構手間がかかるので、ノザンなんてやらずに済むならそれに越したことはないのですが、PCRは万能では無い為、必要になることもあったりするんですよ。

(無題) 削除/引用
No.6560-3 - 2018/01/13 (土) 00:17:20 - 123
今時、どうしてノーザンなんてする必要があるのか理解できない。

(無題) 削除/引用
No.6560-2 - 2018/01/11 (木) 18:17:27 - AP
Rocheので不満ないけどな。不満がないので他所の製品に浮気したことない。
あたらしい製品でなにか画期的なイノヴェーションとか性能の向上とかあったという話を聞いたことがない。むしろ、新しいのが現れては消えの繰り返しのような。

もちろんpoly A精製はするんでしょな?
金かけるんならそこもポイントかも。
特に1.5 kbあたりの標的だと18S rRNAに妨害される可能性も、

non-RI ノザンブロットキットのおすすめを教えて下さい 削除/引用
No.6560-1 - 2018/01/06 (土) 10:54:29 - ノザン
よろしくお願いします。

10数年ぶりにノザンブロットを行うことになりました。その当時はRIを使ってノザンをしていたのですが、今のラボではRIの使用が出来ないので、non-RIでのノザンブロットを検討しています。

RocheのDIG Northern Starter Kitなるものでも買えば楽にいけるかな?と思ってネットで見ていたのですが、ThermoFisherからNorthernMax Kitなるものが売られていたり、non-RIのノザンキットも色々存在するようです。

そこで、non-RIでのノザンを実際に行われている方、お勧めのキットを教えて頂けないでしょうか?

使用するのはマウスの組織から抽出したRNAです。このRNAから合成したcDNAに対してPCRを行い、目的の遺伝子(の一部)が発現していることは確認済みです。ノザンを行って、全長約1.5kbpのバンドを見ることが目的です。PCRの結果、発現量は(なにを基準にそう言うのかとお叱りをうけそうですが)そう高くはないが、nested PCRにしないと検出が出来ないような極微量の発現というものでもありません。

値段は考えなくていい、簡便さとスピードだけ考えろ、とはボスの弁です。なので少々高くついてもかまいません(しかしノザン自体のアウトソーシングでは駄目とのこと)。よろしくお願いします。

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