Bio Technical フォーラム

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MDA- MB- 231の倍加時間 トピック削除
No.6515-TOPIC - 2017/12/09 (土) 21:13:50 - りお
いつも参考にさせていただいております。
MDA MB231細胞を使って実験を始めたばかりの者です。
液体窒素からの凍結細胞を先輩から分けてもらい育てておりますが、
1:3で継代してセミコンフェルトで3日に一回のペースで継代しています。
6継代目でトランスフェクション のため細胞数を数えたところ、10cm
dishで2.0×106乗個、セミコンフェルトとはいえ、ライフテクノロジー社のコンフル細胞数の目安と比べるとかなり少ないかなと思いました。
また1日あたりの増殖率が1.45と倍加時間にして48時間と、一般的な教科書には
だいたい12-36時間とあり遅いのかもと思いました。
前にも別ロットで同じ細胞を育てたことがあり、同じ割合で2日に1回のペースで継代していたので、同じプロトコルで実験を進めて良いか危惧しています。
細胞を頂いたのが質問しにくい先輩のため、同じ細胞を使用された方がいれば、増殖スピードなど教えてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.6515-4 - 2017/12/11 (月) 08:22:05 - おお
その細胞は一度使ったことはありますが、実際どうだったか覚えていません。
一般論として、細胞は同じ名前でも飼っている人によって変わりますし、その上どれが正しいかというものはあまりないです。加えて血清のロットでも変わったりします。確かに譲り受ける前の細胞の状態は確認したほうがいいですが、その今使っている細胞で樹立した実験は、今使っている細胞を使うのに一番適していると思ってもいいかもしれません。

やはり遅いのですね 削除/引用
No.6515-3 - 2017/12/10 (日) 21:54:26 - りお
お返事ありがとうございます。
やはり私の細胞は倍加時間が遅いみたいですね。
ATCCに書かれている通り、L15にCO2フリーで育てています。
他の培地でCO2フリーでなくても育つのですね。
勉強になります。

先生が来週には出張から帰ってくるので、実際に細胞を見てもらって
実験に使えるか相談してみます。

(無題) 削除/引用
No.6515-2 - 2017/12/10 (日) 10:54:31 - なんとなく
使ったことがありますが、24-36hだったと思います。

ATCCのプロトコールではL-15培地(炭酸ガスを使わないインキュベーター)だったと思いますが、RPMI培地(5%CO2)で順化させてしまったので
質問者さんとは環境が違うかもしれません。

ご参考まで。

学生さんなら先生に見ていただくとよいかもしれませんね。

MDA- MB- 231の倍加時間 削除/引用
No.6515-1 - 2017/12/09 (土) 21:13:50 - りお
いつも参考にさせていただいております。
MDA MB231細胞を使って実験を始めたばかりの者です。
液体窒素からの凍結細胞を先輩から分けてもらい育てておりますが、
1:3で継代してセミコンフェルトで3日に一回のペースで継代しています。
6継代目でトランスフェクション のため細胞数を数えたところ、10cm
dishで2.0×106乗個、セミコンフェルトとはいえ、ライフテクノロジー社のコンフル細胞数の目安と比べるとかなり少ないかなと思いました。
また1日あたりの増殖率が1.45と倍加時間にして48時間と、一般的な教科書には
だいたい12-36時間とあり遅いのかもと思いました。
前にも別ロットで同じ細胞を育てたことがあり、同じ割合で2日に1回のペースで継代していたので、同じプロトコルで実験を進めて良いか危惧しています。
細胞を頂いたのが質問しにくい先輩のため、同じ細胞を使用された方がいれば、増殖スピードなど教えてください。

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