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(無題) 削除/引用 No.6510-5 - 2017/12/06 (水) 16:19:06 - AP 標的RNAの豊富さによるけど、 通常、精製された総RNAのうちmRNAは重量ベースで1-2 %だといいます。 １レーンに載せる総RNA量を10 ugにしてもmRNA量としては0.1 ugくらい。0.1 ugのNortherで検出できる標的となると、相当高発現していないと無理。 しかも、10 ugのうちほとんどが28S, 18Sに集中するわけで1バンド数ugという、とんでもない量のRNAがバンディングするわけです。それだけ高濃度にRNAが集中すると、全体の移動度、分子ふるい効果に影響を与えずにはいられます。サイズがおかしくなったり、rRNAより先のレーンが歪んだり（シュリンク）したりします。 また、非特異的につくプローブがそれほど多くなくても、1バンドにそれだけの量rRNAが濃縮されていれば、どうしたってみえてしまうってことはあります。

(無題) 削除/引用 No.6510-4 - 2017/12/06 (水) 12:21:01 - おお プローブが配列上rRNAを引っ掛けやすいなら、たとえば前半２５０bpと後半２５０bpに分けたりしてrRNAがつきにくいプローブの領域を探る。

(無題) 削除/引用 No.6510-3 - 2017/12/06 (水) 07:09:24 - AP poly A 精製する

(無題) 削除/引用 No.6510-2 - 2017/12/06 (水) 02:31:37 - おお rRNAのバンドがなくなるまでちょっとずつstringencyを上げていくというのがたいてい取る方法です。

ノーザンブロット解析 削除/引用 No.6510-1 - 2017/12/06 (水) 01:23:25 - sigen total RNAをナイロン膜に転写させて行ったところ、標識されたプローブが rRNAにくっついてしまったらしく特異性に欠ける結果となりました。 プローブのbpは500くらいです。 原因がわからず相談させていただきました。 考えられる原因とその解決策を教えていただきたいです。

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