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(無題) 削除/引用 No.6469-5 - 2017/11/22 (水) 11:34:12 - くしゅん >[Re:4] おおさんは書きました : > https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2291734/ 参考文献をありがとうございます。 >[Re:2] monさんは書きました : > 濃度表示で「少ない」という表記は意味不明です。 そうですね。少ないもので40ngと書きたかったのですが、うっかりしておりました。 再度エタ沈して濃縮しようと思います。 お二方、早々にご教授いただき、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.6469-4 - 2017/11/22 (水) 01:11:19 - おお https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2291734/

(無題) 削除/引用 No.6469-3 - 2017/11/21 (火) 18:54:23 - mon まあ、貴重でないRNAで比較するのが早いかも。試行錯誤は大切。

(無題) 削除/引用 No.6469-2 - 2017/11/21 (火) 11:08:14 - mon >total RNA量が1~10ug/mlと少ないため、one stepも検討してみたく 濃度表示で「少ない」という表記は意味不明です。薄いなら濃縮すれば良いだけです。 基本的に2-Stepの方が増幅効率は良いですが、手技が増えテクニカルエラーが増える事を懸念しているとして。。。 基本的な考えとして、原理がわからないならマニュアルに従うのが基本です。 また、使用する方が多い＞商売になる＞Kitの開発となるので、kit開発の元になった論文を探せば方法は見つかります。RT-PCRくらいメジャーな技術ならManual本もあるでしょう。あるいはkit(使用酵素）のManualをみれば参考文献が記載されているでしょう。 2-step RT-PCRでは逆転写とPCR増幅を分けて別々の酵素を使う事が多く、それぞれの至適条件が異なる可能性があります。逆転写では汎用Primerを使用しているかも。 kitによっては混ぜても大丈夫なものもあるでしょうが、詳細がわからないと判断できません。RT-PCR kitのように複数社で販売されるいるくらいになると、差別化のためそれぞれで至適化されていると思います。そのため2 Step用の試薬を混合するするのはお薦めできません。ただし1 Stepでも使用できると記載されているkitもあったと思います。

1step real-time PCRはkitがなければ出来ないのか。 削除/引用 No.6469-1 - 2017/11/20 (月) 16:42:19 - くしゅん 近々real-time PCRに挑戦する予定の学部生です。real-time PCRは1stepと2stepの二通りのやり方があるようですが、1stepを行いたい場合、2stepの後半で使う試薬と始めの段階で使う試薬を1つのﾁｭｰﾌﾞに混ぜてreactionさせてはいけないのでしょうか？1step用の試薬kitが必ず必要なのでしょうか。total RNA量が1~10ug/mlと少ないため、one stepも検討してみたく、質問しました。 宜しければ、ご教示お願いします。

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