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培養細胞のアリザリンレッド染色 トピック削除
No.646-TOPIC - 2012/06/19 (火) 10:01:54 - CHIBA
初歩的な質問で失礼致します。

MC3T3-E1における石灰化の評価方法として
アリザリンレッドの使用を検討しています。

染色液は、通常の作成方法?で
@1gアリザリンレッド+100ml蒸留水
A0.1ml 28%水酸化アンモニウム+100ml蒸留水
@にAを加えながら、PH6.4まで調整。

上記、染色液をコンフルエントになった細胞を
10%中性ホルマリンにて固定後(24時間)に直接添加した
ところ、いずれも細胞が剥離してしまう為に
染色が行えません。
dishは、プラスチックボトムでコラーゲンコート
等はしておりません。

原因として
@染色液の組成?濃度がが間違っている?
A細胞の固定方法?時間?が間違っている?
B使用してるdish?

ぐらいは考えてみましたが、どれか原因なのかすら
検討がつかない為、アドバイスを頂ければと思って
おります。

よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.646-4 - 2023/03/06 (月) 08:29:23 - あふ
コートとホルマリンの時間に原因があると思います。

MSCの分化誘導するときは、コートしてますね。Promocellのマニュアルにも

Coat a 6-well tissue culture plate with 10 μg/ml human or bovine fi-bronectin (F0895-1MG/F1141-1MG, Sigma-Aldrich®) according to the instruction manual.

とあります。

ホルマリン24hもちょっと長くないですか?私はメタノールで4℃20分でやっています。

(無題) 削除/引用
No.646-2 - 2012/06/19 (火) 20:07:44 - あかさ
その条件で、全然問題ないですよ。

繰り返しても、変わらないようなら
染色液を希釈してみたらいかがですか?

培養細胞のアリザリンレッド染色 削除/引用
No.646-1 - 2012/06/19 (火) 10:01:54 - CHIBA
初歩的な質問で失礼致します。

MC3T3-E1における石灰化の評価方法として
アリザリンレッドの使用を検討しています。

染色液は、通常の作成方法?で
@1gアリザリンレッド+100ml蒸留水
A0.1ml 28%水酸化アンモニウム+100ml蒸留水
@にAを加えながら、PH6.4まで調整。

上記、染色液をコンフルエントになった細胞を
10%中性ホルマリンにて固定後(24時間)に直接添加した
ところ、いずれも細胞が剥離してしまう為に
染色が行えません。
dishは、プラスチックボトムでコラーゲンコート
等はしておりません。

原因として
@染色液の組成?濃度がが間違っている?
A細胞の固定方法?時間?が間違っている?
B使用してるdish?

ぐらいは考えてみましたが、どれか原因なのかすら
検討がつかない為、アドバイスを頂ければと思って
おります。

よろしくお願い致します。

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