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(無題) 削除/引用 No.6425-9 - 2017/10/29 (日) 13:34:08 - おお >制限酵素でのチェックもしてみたんですが、 切らないで流してください。そちらのほうが傷み具合がみえます。

(無題) 削除/引用 No.6425-8 - 2017/10/29 (日) 12:19:17 - トピ主です。 totoさん、無視はアメリカではよくあることですね。 やはり電話が一番だと思います。オリジーンはですがいいメーカーだと思います。

(無題) 削除/引用 No.6425-7 - 2017/10/29 (日) 12:18:05 - トピ主です。 APさん、調べていただいて有難うございます！ こういう文言は何にでも書いてあるのかと思っていましたが、そうでも無いのでしょうか。てっきり利益を得るためにそういう文言があると思っていました。 具体的に宿主など変えてみたほうがいいのでしょうか、、、一度といあわせたのちに考えてみます。 >[Re:4] APさんは書きました : > 手っ取り早くサイトにあるdisclaimerをコピペしますが、 > Due to the inherent nature of this plasmid, standard methods to replicate additional amounts of DNA in E. coli are highly likely to result in mutations and/or rearrangements. Therefore, OriGene does not guarantee the capability to replicate this plasmid DNA. Additional amounts of DNA can be purchased from OriGene with batch-specific, full-sequence verification at a reduced cost. Please contact our customer care team at custsupport@origene.com or by calling 301.340.3188 option 3 for pricing and delivery. > > リーキー発現による毒性のため、増えにくく、増えたとしても変異が入っている可能性が高い(ありがちです)。自前で増やすことは保証できない。量がもっといるならお安くしときますよ。 > ってことみたいですね。 > 自前で増やすなら、リーキー発現への対策として、宿主とか培養条件を工夫する必要があるでしょう。

(無題) 削除/引用 No.6425-6 - 2017/10/29 (日) 12:14:17 - トピ主です。 おおさん、 オリジーンに問い合わせしてみます！ 制限酵素でのチェックもしてみたんですが、予想通りのバンドが出ました。原液を使って。

(無題) 削除/引用 No.6425-5 - 2017/10/29 (日) 10:12:56 - toto 最近、Origeneから抗体を購入したときに、手続きで書類が必要になり�Acustsupport@origene.comに何度もメールしましたが、全くなしのつぶてでした。大学の事務が認めてくれたので何とかなりましたが、返信すらないなんて、直接購入で初めてのトラブルでした。電話したらさすがに誰かは出るでしょうから、電話の方がいいのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.6425-4 - 2017/10/29 (日) 08:49:38 - AP 手っ取り早くサイトにあるdisclaimerをコピペしますが、 Due to the inherent nature of this plasmid, standard methods to replicate additional amounts of DNA in E. coli are highly likely to result in mutations and/or rearrangements. Therefore, OriGene does not guarantee the capability to replicate this plasmid DNA. Additional amounts of DNA can be purchased from OriGene with batch-specific, full-sequence verification at a reduced cost. Please contact our customer care team at custsupport@origene.com or by calling 301.340.3188 option 3 for pricing and delivery. リーキー発現による毒性のため、増えにくく、増えたとしても変異が入っている可能性が高い(ありがちです)。自前で増やすことは保証できない。量がもっといるならお安くしときますよ。 ってことみたいですね。 自前で増やすなら、リーキー発現への対策として、宿主とか培養条件を工夫する必要があるでしょう。

(無題) 削除/引用 No.6425-2 - 2017/10/29 (日) 08:22:47 - おお OriGeneに一度報告してみるのがいいかと。１マイクログラム位をなんの処理もせずに泳動したらダメージの受け具合が想像できると思いますけど。 直接培養細胞にTransfectionできるぐらいのグレードかどうかはよくわかりませんけど。

OriGeneから購入したプラスミドが増えない 削除/引用 No.6425-1 - 2017/10/29 (日) 07:44:14 - OriGene アメリカ留学中のものです。 OriGeneが私が興味のある遺伝子(p53)のプラスミドをディスカウントしており、早速購入しました。 ＄560が＄98ドルでした。 ただ、この届いたプラスミドの原液を使って293Tに発現させてもmyc、FLAGタグ抗体のいずれでもWBではバンドは見られませんでした。隣のウェルに導入したGFPはきちんと入っていました。 不思議だな、と思い、届いたプラスミドの原液を使って、形質転換させました。 DH5アルファ＋カナマイシン（10マイクロg/ml）で形質転換を行いましたが、10pgを使用しても大腸菌は一つも生えませんでした。そこで、えいや！と原液1マイクロL（つまり、100ng）を使ったところ、漸く5つほど生えまして、早速ミニカルチャーをしたところ増殖が大変遅く、6つピックアップしたところそのうち5つは増えて来ませんでした。 origene.com/orf_clone/NM_000546/RC200003/TP53.aspx この驚いたほどのディスカウントの理由は、古い在庫処分のため、だったりするのでしょうか？ 古過ぎて壊れているという可能性はあるのでしょうか。 原液のシークエンスはしました。きちんと配列は読めていました。 一度原液のものを制限酵素処理して、ベクターを載せ替えた方がよいのかもしれませんが、いかんせん気持ちが悪いです。当方、クローニングはルーチンに行って来て居ますので、手技的な問題ではないと思うのですが。。ちなみにプラスミドは購入したばかりです。 コメントをお寄せいただけますと幸いです。

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