BioTechnicalフォーラム [FACS用抗体について]

FACS用抗体について

No.6419-TOPIC - 2017/10/26 (木) 18:12:45 - K.T

こんにちは。皆さんに教えて頂きたいことがあります。

自分は今、担癌マウスから摘出した腫瘍組織を酵素処理し、がん細胞の回収を行っているのですが、回収した細胞群の内、どれほどの割合が癌細胞であるかを評価したいと考えています。

方法としては、FACSを用いて癌細胞を検出し、全細胞に対するがん細胞の割合を評価しようと考えているのですが、FACSで検出する為の、がん細胞特異的なマーカーがわかりません。
細胞は、B16BL6を使っています。このがん種は、マウス悪性黒色腫由来のがん細胞で、腫瘍組織が黒色です。

なにか、お勧めの抗体をご存知の方がいらっしゃれば教えてください。
よろしくお願いします。
　

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No.6419-8 - 2017/10/27 (金) 06:27:18 - おお

わかっている変異などをつかってPCRで評価するてもなくはないよね。

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No.6419-7 - 2017/10/26 (木) 23:27:44 - メラニン

皮下にできた真っ黒な腫瘍のほとんどはがん細胞で血液、血管が混ざってる感じのものですよね。
どんな細胞があるか想定されてますでしょうか？
担癌マウス作ってくれる人にGFP入りの作ってくださいとお願いするとか。
私もB16をFACSで検出できる抗体があるならば知りたいです。
CD74とかヒトのメラノーマ株 A375, MeWo, SB2で発現してて
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4640965/pdf/nihms696064.pdf
マウスのB16F10ではWesternで見えてるらしいのに
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3960192/pdf/oncotarget-05-0103.pdf
私がB16BL6でmauseCD74抗体でFACSしても見えないです。やり方あるなら教えてほしいです。
切片を免疫染色ならMelanAで染まります。

(無題)

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No.6419-6 - 2017/10/26 (木) 20:03:49 - ガングリオシド

ガングリオシドGD3だろ

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No.6419-5 - 2017/10/26 (木) 19:24:57 - mon

培養できるなら遺伝子導入も出来るので、GFPの導入をお勧めしますが。
（培養細胞への遺伝子導入は遺伝子組換え実験に該当しない、導入細胞も遺伝子組換え体に該当しないが、GFP発現plasmidを大腸菌で増やすことは遺伝子組換え実験P1レベル）
一応melanoma marker抗体を検索すると、例えば
http://www.funakoshi.co.jp/contents/8865
マウスに交差性があるものが販売されていますがB16BL6およびFACSに使えるか否かは不明。
実施例を探して論文を検索するしかないかも。

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No.6419-4 - 2017/10/26 (木) 19:01:42 - おお

細胞にGFPでも発現させたらいいんじゃないか、安定導入して。

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No.6419-3 - 2017/10/26 (木) 19:01:08 - K.T

ゆずさん

回答いただきありがとうございます。
GFPを発現させたいのは山々なのですが、私のラボには
その技術がございません。とても古い研究室でして、、、

可能であれば、細胞回収後になんらかの操作で
がん細胞だけを標識し、FACSにかけたいです。

なにか思いつきますでしょうか。

(無題)

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No.6419-2 - 2017/10/26 (木) 18:34:51 - ゆず

B16に最初にGFPなどを発現させておけばよし。