Bio Technical フォーラム

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アラマーブルーの測定 トピック削除
No.6418-TOPIC - 2017/10/26 (木) 00:01:23 - transparent
アラマーブルーで細胞の増殖を見ているのですが、
その測定の際のプレートなどについて教えて欲しいことがあります。

いま、研究室では培養で使用している96のクリアプレートで励起波長540nm、検出波長590nmで測定しています。
しかし、製品添付文書を見ますと570nmの吸光度を測る方法もあるようです。

知りたいのはどちらが感度など良いのか、違いはあるのか?ということと、励起波長で蛍光を測定するのであればクリアプレートではなく蛍光用のプレートで培養、測定した方が良いのではないか?ということです。

先輩に聞きましたが、今の方法で測定できているからいいんじゃないと。

自分で比較すればよいとは思いますが、ご存知の方教えていただきたいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.6418-4 - 2017/10/29 (日) 08:29:05 - おお
そのプレートを吸収でも測定してみて吸収で蛍光とほぼ同じなら吸収で実験すればすっきりしないとかわだかまりを持たないで結果を出せると思いますが、、、極微量ということでの検出感度はいいかと思いますが、色の変化が目で見れているくらいなら蛍光のメリットは殆どないと思います。5%や10%誤差が出るような系で1%の変化の検出は意味がないわけですから、そういうござのレンジでは吸収で十分カバーできるでしょうし。

monさん 削除/引用
No.6418-3 - 2017/10/28 (土) 14:44:30 - transparent
monさん

お答えありがとうございます。
測定感度は蛍光のほうが良いんですね。
となるとプレートの問題ですが、おっしゃるとおり黒で底が透明なものとなるとお値段しますし、クリアプレートでも影響を受けずに測定できているならあまり気にしなくてよしとしとくかですね。

プロトコルなど調べてみても、プレートに関する注意はなく、でも蛍光だしどうなんだろうと気になっておりました。

今のところ結果もそれほど変ではないので、ちょっとすっきりしませんがあまり気にしないでおこうと思います。

他にも皆さんどのように測定されているかご意見ありましたら教えていただきたいです。
よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用
No.6418-2 - 2017/10/26 (木) 19:08:25 - mon
細胞数が少ないときの感度は、蛍光の方が良いでしょう。
吸光度で測定していましたが、ダイナミックレンジは1桁がせいぜいでした(0.1~1程度)

またマニュアルには問題ないと記載されていましたが、培地の色変化(phenol red)の影響を受けるので、phenol red不含の培地を使っていました。
蛍光測定では通常黒色のプレートを使うのかな?隣のwellの影響を受けないためと聞いています。でも細胞が観察できないので不便だなと思ったことがあります(底が透明なものは高価)。一旦測定液を移せばよいですが面倒ですね。
隣のwell(およびplateの自己蛍光)の影響を受けていないなら、クリアプレートでも良いと思います。

アラマーブルーの測定 削除/引用
No.6418-1 - 2017/10/26 (木) 00:01:23 - transparent
アラマーブルーで細胞の増殖を見ているのですが、
その測定の際のプレートなどについて教えて欲しいことがあります。

いま、研究室では培養で使用している96のクリアプレートで励起波長540nm、検出波長590nmで測定しています。
しかし、製品添付文書を見ますと570nmの吸光度を測る方法もあるようです。

知りたいのはどちらが感度など良いのか、違いはあるのか?ということと、励起波長で蛍光を測定するのであればクリアプレートではなく蛍光用のプレートで培養、測定した方が良いのではないか?ということです。

先輩に聞きましたが、今の方法で測定できているからいいんじゃないと。

自分で比較すればよいとは思いますが、ご存知の方教えていただきたいです。

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