全8件 ( 1 〜 8 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.6399-8 - 2017/10/21 (土) 08:48:11 - mon > 掲載してくださった同名の酵素を使用していますが、 > なかなかかかりが悪いので。。。。 Zymo社製は他社製より性能が良いのを売りにしているようですよ。

(無題) 削除/引用 No.6399-7 - 2017/10/20 (金) 01:28:29 - おお ちょっと確かめてないですけどメチルシトシンで合成はできますよね、たしか、 短ければ全合成してしまうのも手かもしれない。ただ、GCばかりじゃ配列が単純になってしまうのでミスアニーリングが増えないような工夫が必要かもしれない。 ある程度長さがあるなら、部分合成かメチレーションされている部位だけPCRで合成して、ライゲーションやExtensionで全長を作るとか。

(無題) 削除/引用 No.6399-6 - 2017/10/19 (木) 19:52:22 - AP ターゲットはどれくらいの長さで、どこら辺にどれくらいの範囲のCpG配列をメチル化したいのだろうか？

(無題) 削除/引用 No.6399-5 - 2017/10/19 (木) 19:38:37 - aaa おおさん> 返信ありがとうございます。 アブストだけ読ませていただきましたが、この手法ですと、 CpG配列だけでなく、 すべてのシトシン塩基が置換されてしまいますので、 利用は難しそうです。

(無題) 削除/引用 No.6399-4 - 2017/10/19 (木) 19:36:09 - aaa mozさん> 返信ありがとうございます。 掲載してくださった同名の酵素を使用していますが、 なかなかかかりが悪いので。。。。 泳動結果を見る限り、よくて50%程度です。 試薬を新しくしたり、条件を変えて見てもうまくいかず、 他のやり方を模索している状況です。

(無題) 削除/引用 No.6399-3 - 2017/10/19 (木) 14:09:39 - おお https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC333784/ こんなのあったよ。 配列によってはかかりにくいみたいで、Taqより高い温度で変性できる酵素とかそういうのも手なのかな。ベタインやDMSO入れてもいいかもしれないけど。

(無題) 削除/引用 No.6399-2 - 2017/10/19 (木) 12:52:28 - moz 経験はありませんが、CpG Methylaseは使えないのですか？ http://www.zymoresearch.com/epigenetics/dna-methylation/dna-methyltransferases/cpg-methylase-m-sssi

メチル化状態を維持したままPCR 削除/引用 No.6399-1 - 2017/10/19 (木) 12:19:45 - aaa 題目の通りです。 ダメ元でお聞きしたいのですが、 CpG配列をメチル化したDNAを大量に作りたいのですが、 なかなかうまくいかず（使用している酵素が働かないなど） 苦戦しています。 PCRに関わらず、 もしこのようなことができる技術等がありましたら、 教えていただけると助かります。 宜しくお願い致します。

全8件 ( 1 〜 8 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---