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緩衝液作成 溶けない トピック削除
No.6382-TOPIC - 2017/10/11 (水) 20:28:41 - ga
お世話になっております。

ある緩衝液を現在作成中です。(組成は以下の通り)
NaCl 125mM, KCl 4.8mM, CaCl2 1.2mM, MgSO4 1.2mM, D-glucose 5.6mM, KH2PO4, Tris 25mM
溶解度を考えると全て容易に水に溶けるはずなのですが、スターラーで攪拌しながら溶かそうとしても白い沈殿物が現れてしまいます。

ちなみに1M HClを4mlほど加えるとこの沈殿は溶け、溶液は透明になります。

同濃度のHEPESを使用した際は全て溶けたので、Trisに問題があると思うのですが、原因がわかりません。

ご教授いただけましたら幸いです。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.6382-11 - 2017/10/17 (火) 14:17:58 - ga
みなさんご回答ありがとうございました。

次回は1M Tris-HClを希釈する形で作製してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.6382-10 - 2017/10/13 (金) 01:09:00 - おお
>リン酸がカルシウムやマグネシウムと相性が悪いです。
明記されている文献等ございましたら教えていただけると幸いです。

ttps://en.wikipedia.org/wiki/Tricalcium_phosphate
Solubility in water
0.002 g/100 g

ttps://en.wikipedia.org/wiki/Dicalcium_phosphate
Solubility in water
0.02 g/100 mL

ttps://en.wikipedia.org/wiki/Monocalcium_phosphate
Solubility in water
2 g/100 mL

アルカリになり、リン酸のHが電離すればするほど溶けにくいTricalcium_phosphateが生じることがわかります。

(無題) 削除/引用
No.6382-9 - 2017/10/12 (木) 22:22:48 - mon
ついでですが
通常生物・医学系実験に使う溶液に関して、TrisやHEPESは汎用することと緩衝能が強いため、1M Tris-HClや0.5M HEPES-NaOHで予めpHを調製したものを作製しストック溶液とします。それを目的溶液に加えて調製します。
Trisは温度でpHが多少変化するので注意が必要ですが、どちらも希釈によるpH変化はほとんどありません。
リン酸緩衝液はリン酸濃度、NaCl(KCl)濃度によってpHが変化するので注意(基本的に、全ての塩等を混ぜたあとでpH調整が必要)。といえ、汎用液は重量で混ぜれば完成するレシピがあります。

(無題) 削除/引用
No.6382-8 - 2017/10/12 (木) 22:01:02 - 774R
カルシウムを加えるときは粉末ではなく 薄い水溶液として加えるといいです。

(無題) 削除/引用
No.6382-7 - 2017/10/12 (木) 21:45:44 - 774R
リン酸カルシウムが析出してるんでしょう。

(無題) 削除/引用
No.6382-6 - 2017/10/12 (木) 20:12:28 - ga
おおさんご指摘ありがとうございます

>リン酸がカルシウムやマグネシウムと相性が悪いです。
明記されている文献等ございましたら教えていただけると幸いです。

>お示しの溶液でTrisはHClでpHを合わさないで作るものなのですか?
HClでpH 8程度に調整したものを作成予定です。
試しにHClを加えてみたところ溶解し、pHを測定するとpH 8.6程度であったため、さらにHClを追加して目的のpHへ調整することで使用可能と考えていましたがいかがでしょうか…
HEPESは中性側かつ同組成の緩衝液を作成する際に使用しました。

(無題) 削除/引用
No.6382-5 - 2017/10/12 (木) 01:37:45 - おお
>同濃度のHEPESを使用した際は全て溶けたので、Trisに問題が

ケミカルがもんだいになるよりpHがもんだいなのかもしれませんよHEPESはそのまま溶かすと酸性で、TRISはアルカリ性です。HEPESに変えるのはいいけどpHが(合わせなければ)違う溶液になってしまってますよ。

お示しの溶液でTrisはHClでpHを合わさないで作るものなのですか?

(無題) 削除/引用
No.6382-4 - 2017/10/12 (木) 01:31:24 - おお
>1M HClを4mlほど加えるとこの沈殿は溶け
pHが変わりますが、、、いいんでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.6382-3 - 2017/10/12 (木) 01:29:58 - おお
リン酸がカルシウムやマグネシウムと相性が悪いです。全体的に維持できる組成だとしても混ぜ方で結果が違うかもしれません。

訂正 削除/引用
No.6382-2 - 2017/10/11 (水) 20:40:09 - ga
KH2PO4 1.2mMです。
すみません。

緩衝液作成 溶けない 削除/引用
No.6382-1 - 2017/10/11 (水) 20:28:41 - ga
お世話になっております。

ある緩衝液を現在作成中です。(組成は以下の通り)
NaCl 125mM, KCl 4.8mM, CaCl2 1.2mM, MgSO4 1.2mM, D-glucose 5.6mM, KH2PO4, Tris 25mM
溶解度を考えると全て容易に水に溶けるはずなのですが、スターラーで攪拌しながら溶かそうとしても白い沈殿物が現れてしまいます。

ちなみに1M HClを4mlほど加えるとこの沈殿は溶け、溶液は透明になります。

同濃度のHEPESを使用した際は全て溶けたので、Trisに問題があると思うのですが、原因がわかりません。

ご教授いただけましたら幸いです。
よろしくお願いいたします。

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