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シークエンスの読み方 トピック削除
No.6356-TOPIC - 2017/10/02 (月) 23:09:53 - シークエンス
シークエンス解析後、FinchiTVの波形と読まれた配列のデータを頂いたのですが、この配列が、実際の遺伝子配列と相違ないかは、一つ一つ目視で確認していくのでしょうか?それともBlastなどで比較して、違っているところを見つけるものなのでしょうか?
 
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No.6356-14 - 2017/10/06 (金) 04:25:03 - おお
まず見逃すってどういうことかと、、、
そのcDNAを使うにしても、その配列を使うことは明らかであり、ありのまま報告するわけですから。

培養細胞由来といいますが、その細胞はどういう人、動物(Subject)の細胞ですか?癌ですか?
ブラストでヒットした配列は何由来の配列ですか。

SNPsは病気と関連しているかはデーターベースでも調べられるはずです(発表などがされたものは)。

健常の人、動物だからといって病気に関連しないSNPsとは限りません。病気でなくても人種やマウスStrain間の違いに関連するものもあると思います。もちろん正常なSubjectから得られる配列だから機能として大きな違いはないだろうという考え方をする場合もあるでしょう。またアルコール耐性など人種による違いが配列の違いとして明らかなものもあります。

その配列を持つプラスミドなどで実験している論文はありますか?

もし蛋白をコードしているなら、アミノ酸配列に違いが出ますか?

上記のことは実際あなたの手元の配列を使うにしても知っておくべきことでもあります。同じ研究をするような状況でも、研究者によって違う判断をする場合もあります。マルかバツかで考える癖がついているならすこし修正していったほうがいいでしょう。いいか悪いかの前に徹底的に考えてください。結局のところSNPsの影響が調査で明確にわからない場合もあります。そんなとき、両方の配列でやってみるというのも「選択肢」です。比較して差がないというのも重要な知見でそれをメインに論文はかけないけど、あなたが発表する論文にその結果を付け加えておくといいでしょう。わからないものを明らかにするのは研究者の姿勢ではないでしょうか?

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No.6356-13 - 2017/10/05 (木) 19:48:21 - AP
>一つ一つ目視で確認していくのでしょうか?それともBlastなどで比較して、違っているところを見つけるものなのでしょうか?

それ専用のソフトもありますが、
1) アライメントができる(BlastよりもClastalが適している)。
2) 波形を表示できる。
ような機能を備えたソフトを使うと能率が上がると思います。

Freeのものなら、
BioEdit
SnapGene Viewer
ApE
CLC sequence viewer (クロマトグラム表示はできないかも)
あたりはどうでしょう。

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No.6356-12 - 2017/10/04 (水) 19:38:43 - mon
培養細胞は不死化しているので、細胞増殖に関係ない(あるいは促進する)いろいろな遺伝子変異が蓄積している可能性があります。もしがん細胞由来ならより激しく変異している可能性があります。
正常細胞由来でも二倍体なので、病因劣性(潜性)変異を有している可能性があります。

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No.6356-11 - 2017/10/04 (水) 18:26:57 - ふむふむ
シークエンスさん

横から失礼しますが、これだけの情報ではその配列の違いがSNPsなのか、仮にSNPsだったとしても、無視してよいものかは判断できない、という意味だと思います。

研究背景や研究内容、手法が具体的に説明されていないので、少なくとも私は、その塩基配列の違いの意味を解釈することはできないです。

ご参考までに

(無題) 削除/引用
No.6356-10 - 2017/10/04 (水) 18:11:00 - よっしー
先生あるいは先輩や上司と相談しましょう.

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No.6356-9 - 2017/10/04 (水) 17:41:33 - シークエンス
おおさん
すみません、意味されているところが本当に分からないです。ご教示頂けますか?

(無題) 削除/引用
No.6356-8 - 2017/10/04 (水) 16:09:13 - おお
もう、、、だから、、、

(無題) 削除/引用
No.6356-7 - 2017/10/04 (水) 11:38:06 - シークエンス
おおさん

培養細胞由来のcDNAを鋳型にPCRした産物の配列を読みました。培養細胞由来なので、病気と関連したSNPsではないのではと思い、見逃しても良いのではと思ったのですが、如何でしょうか?

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No.6356-6 - 2017/10/04 (水) 03:04:25 - おお
>[Re:5] シークエンスさんは書きました :

> 今回の場合、SNPsは影響ないものとして見逃してもよいものなのでしょうか?

あなたがなんの研究をしているかわからない状態で、あなたの今回の場合と言う条件で尋ねられても答えようがないです。SNPsは病気と関連性があるものもありますし、一概に影響ないとは言い切れません。また、配列が違うからSNPsだろうと簡単に結論づけていいのかもよく考えるべきです。

(無題) 削除/引用
No.6356-5 - 2017/10/03 (火) 21:58:00 - シークエンス
monさん
ありがとうございます。
今回の場合、SNPsは影響ないものとして見逃してもよいものなのでしょうか?

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No.6356-4 - 2017/10/03 (火) 21:48:24 - mon
SNPsでしょう。正常人由来cDNAライブラリーからクローニングしても、まあまあ経験します。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/
等で調べてみたら。

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No.6356-3 - 2017/10/03 (火) 21:18:53 - プラスミド
おおさん

ありがとうございます。
シークエンスの結果をBLASTを用いて解析しているのですが、自分の問い合わせた配列の中に、データベース上の目的遺伝子のmRNA配列と1塩基だけ異なる塩基が含まれていました。しかしながら、RIKENのcDNA libraryの配列とであれば一致しており、このような場合、どちらを信用すればよろしいのでしょうか?
よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用
No.6356-2 - 2017/10/03 (火) 03:34:27 - おお
自分にあった方法でやればいいです。

シークエンスの読み方 削除/引用
No.6356-1 - 2017/10/02 (月) 23:09:53 - シークエンス
シークエンス解析後、FinchiTVの波形と読まれた配列のデータを頂いたのですが、この配列が、実際の遺伝子配列と相違ないかは、一つ一つ目視で確認していくのでしょうか?それともBlastなどで比較して、違っているところを見つけるものなのでしょうか?

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