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(無題) 削除/引用 No.6350-7 - 2017/10/02 (月) 11:37:24 - AA キメラが得られない、Germlineに乗らない、というケースで ESを使い切った場合、再度購入ということもあります。 諸々考えると、今は自分で樹立したほうが結果的に早くて安い気がしますね。

(無題) 削除/引用 No.6350-6 - 2017/10/02 (月) 02:32:12 - TK-1 最短 1. ES microinjection, transfer to foster, chimera born ~3wk 2. wait until chimera reaches the breeding age, 8wk 3. Cross to Flp or Cre tg to obtain germline transmission (heterozygous F1) and deletion of selection cassette, ~3wks 4. wait until F1 mice reach the breeding age, 8wk 5. intercross heterozygous F1 and obtain homozygous, 3wk 6. Wait until homozygous mice get old enough for experiments, 1-3 months (assumption: Cre or Flp tg has no influence on the phenotype). Sangerは知りませんが、今時のKOMPやEucommのESはB6N-derivedなので　バックグラウンド云々は大きな問題にならないでしょう.

(無題) 削除/引用 No.6350-5 - 2017/09/30 (土) 17:23:44 - おお KOマウスができても、バックグランドを揃えたりとか言う作業も必要になるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.6350-4 - 2017/09/30 (土) 09:31:01 - mon ES細胞の状態が悪いと、キメラマウスが得られない、ヘテロ接合体が得られない（germlineに乗らない）〜少ないときがあります。

(無題) 削除/引用 No.6350-3 - 2017/09/30 (土) 09:26:13 - mon ＞僕の理解が正しければ、そのES細胞を受精卵（胚盤胞）に移植して、そこから生まれてくる子がノックアウトマウスということになるのでしょうか？ 間違いです。最初に生まれてくるのはキメラです。 （掛け合わせ方にもよりますが通常）次の世代で得られるのはヘテロ接合体です。 ヘテロ接合体同士を掛け合わせて漸くKOマウスが得られます。

(無題) 削除/引用 No.6350-2 - 2017/09/30 (土) 07:18:59 - TK-1 単純にノックアウトが欲しいだけなら、CRISPRでやった方が速いでしょう。

ES細胞からKOマウスを作るまでの時間について 削除/引用 No.6350-1 - 2017/09/30 (土) 06:04:28 - ES お世話になります。 興味ある遺伝子のKOマウスを解析したいと考えていますが、そのマウスはこれまでに報告がありません。 あまり詳しくはありませんが、Wellcome Trust Sanger Instituteからその遺伝子のKOのES細胞が売られているようです。 僕の理解が正しければ、そのES細胞を受精卵（胚盤胞）に移植して、そこから生まれてくる子がノックアウトマウスということになるのでしょうか？だとすれば自分でノックアウト用のコンストラクトを作る必要もありませんし、スクリーニングも必要ないということになります。 そしてKOマウスもすぐ（数ヶ月以内に）に手に入る、という理解でいいのでしょうか？ Wellcome Trust Sanger InstituteからES細胞を購入されたこと、あります方、いらっしゃいますでしょうか？

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