Bio Technical フォーラム

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GloMax Luminometerに必要なサンプル溶液量について トピック削除
No.6347-TOPIC - 2017/09/29 (金) 05:28:40 - ルック
ルシフェラーゼアッセイの最後の測定のところで、どうにか基質を節約できないか考えています。

現在、プロメガの基質溶液100 ulを1.5mlエッペンチューブに入れ、そこへライセートを20 ul入れて、測定しています。

実際のところ、このルミノメータに必要な試薬の溶液量はどの程度まで減らせるのでしょうか。
たとえばプロメガの基質溶液50 ulに対してライセートを10 ul入れた半量スケールでも大丈夫なのでしょうか。実際試してみれば早いのですが、試薬を節約することを念頭においているため、皆様からご意見を伺った方が良いと思い、質問いたしました。いかがでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.6347-3 - 2017/09/29 (金) 09:42:42 - おお
384 Wellで検出したりすることもありますので、容量的には25ー50ulでも測れるでしょうね。フォトンがフォトマル(機種によってはフォトダイオードだっけ、フォトトランジスタだっけ)に当たる数を数えているわけで容量がクリティカルになるものではないと思います。ただし弱い活性はノイズによる誤差も大きくなると思いますけど。

(無題) 削除/引用
No.6347-2 - 2017/09/29 (金) 08:00:14 - mon
1本ごとにエッペンで測定ですか。それなら1/10量でも測定出来るでしょう。ただし測定値は1/10になります。
問題点を上げれば分注誤差による測定値のブレが大きくなることでしょうか。ピペットマンのシーリング等を確認(交換)して分注誤差・操作誤差を減らしましょう。
96well plateで測定する場合は、予め分注しているライセートの乾燥およびインジェクターの分注精度が問題になりますので試行実験が必要でしょう。

GloMax Luminometerに必要なサンプル溶液量について 削除/引用
No.6347-1 - 2017/09/29 (金) 05:28:40 - ルック
ルシフェラーゼアッセイの最後の測定のところで、どうにか基質を節約できないか考えています。

現在、プロメガの基質溶液100 ulを1.5mlエッペンチューブに入れ、そこへライセートを20 ul入れて、測定しています。

実際のところ、このルミノメータに必要な試薬の溶液量はどの程度まで減らせるのでしょうか。
たとえばプロメガの基質溶液50 ulに対してライセートを10 ul入れた半量スケールでも大丈夫なのでしょうか。実際試してみれば早いのですが、試薬を節約することを念頭においているため、皆様からご意見を伺った方が良いと思い、質問いたしました。いかがでしょうか?

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