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(無題) 削除/引用 No.6342-4 - 2017/09/27 (水) 22:31:25 - q1a2swijkolp blocking はskim milkでなくてBSAを使いました。milkの主要成分のケーシンに多いのはphospho serine だったようにおもうのですがp-tyrモノクロナル抗体でも反応してしまうのでしょうか。bufferはPBSのPがなんとなく気になったのでTBSを使いました。希釈率はメーカー推奨濃度です。その他は一般的なimmunoblottingに準じていて特筆することはありません。 p-Try 抗体は抗原抗体反応時のbufferの塩濃度が結構影響するというような記述を昔見た気がするのですが、記憶が定かでありません。しってるひといたらおしえてくださいおねがいします。

(無題) 削除/引用 No.6342-3 - 2017/09/27 (水) 21:54:34 - み ブロッキングと抗体希釈時のﾊﾞｯﾌｧｰは何を使用してますか？ スキムミルクは駄目ですよ。 あなたが行った方法を可能な限り詳細に提示しないと的確な指摘はしにくい。

(無題) 削除/引用 No.6342-2 - 2017/09/27 (水) 21:51:53 - MP もしブロッキングにミルクを使っていたらそうなります。

p-Tyr MAb(PY20)の件で 削除/引用 No.6342-1 - 2017/09/27 (水) 21:23:19 - q1a2swijkolp;@ 抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（PY２０）によるウェスタンブロットでバックグラウンドがとても高いのですがどうしたらいいでしょうか。真っ黒のバックをコントラスト操作でシグナル強度を下げて行くと、バンドは現れてきて処理．・未処理サンプル間で強度に差はあるので、一応P−tyrは認識しているようなのですが。それを覆い隠すように膜全体が強くそまります。

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