Bio Technical フォーラム

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微量増減の評価 トピック削除
No.6305-TOPIC - 2017/09/12 (火) 18:39:19 - セルカウント
微量の培養細胞を使い、薬剤添加後に、細胞数が増減したのかを評価したいと考えています。

トリパンブルー等の生死判定はしたことがあるのですが、少数細胞を定量性良く評価する場合にはどのような方法が一般的かご教授していただけると幸いです。
例えば、遺伝子のコピー数を基準にしてこのような目的を達成することもできるのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.6305-4 - 2017/09/14 (木) 05:14:57 - おお
遺伝子のコピー数でできるかと言われれば、理論的にはありえますのでテクニカルなブレなど検証した上で使ってもいいでしょうけど、Total DNA量で細胞数を見積もるという方法論もあります。

https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-642-77817-9_6
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4029265

(無題) 削除/引用
No.6305-3 - 2017/09/13 (水) 00:48:02 - おお
微量の培養細胞って何個?どれくらいの濃度(密度)?
おそらく384のプレートでもMTTなどの各種試薬を使うことはできるだろうけど。MTTのほかにプロメガがいろいろな種類のアッセイ方法を商品にしてます。だいたい何個の細胞を検出しているかなどもカタログで代表的な例で提示されています。そういうのを見て、これはどうかとかいう質問なら使用した人があればレスが付くかもしれません。細胞にあるATP量を図ってCell viabilityとするようなキットも有り、これは検出感度高いのかもと漠然に思っています。

画像判定 削除/引用
No.6305-2 - 2017/09/12 (火) 18:47:26 - ema
私はwell全画面低倍でとるかタイリングのようなことをして(1視野だと偏る)画像を取得して、細胞数計測しています。
遺伝子のコピー数は変動しないと確定しているコントロール遺伝子(本当は結構難しい)を選ぶのが大変だと思います。

微量増減の評価 削除/引用
No.6305-1 - 2017/09/12 (火) 18:39:19 - セルカウント
微量の培養細胞を使い、薬剤添加後に、細胞数が増減したのかを評価したいと考えています。

トリパンブルー等の生死判定はしたことがあるのですが、少数細胞を定量性良く評価する場合にはどのような方法が一般的かご教授していただけると幸いです。
例えば、遺伝子のコピー数を基準にしてこのような目的を達成することもできるのでしょうか?

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