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(無題) 削除/引用 No.6296-3 - 2017/09/12 (火) 17:43:37 - att コメントありがとうございます。 プロモーターも細胞も違うので、なんとも言えないのですが、 ZsGreenが入ったstableと、EGFPのstableを並べて見る機会があり、 一般的な理解だと、ZsGreenの方が明るいのだと思いますが、 あれ、この顕微鏡だとEGFPの方が明るい？のかな？くらいの印象がありました。 コンフォーカルで見れば、ZsGreenの方が明るい感じだったので ？？？と思い、付いてるFilterキューブの型番見て、もしかして、と思ったところです。 FarRedとかと違い十分明るいので、実験目的にはどっちでも良いですが、もしご存知の方がいれば、お聞きしたかった次第です。

(無題) 削除/引用 No.6296-2 - 2017/09/12 (火) 16:39:56 - おお 発現量や検出感度にもよるからなんとも言えないけど、オリンパスにそのフィルターでのEGFPなどの使用感を聞いてみてはどうでしょうか？ （E）GFPなどつかうと結構安定な蛋白なので遺伝子からのmRNAが作られなくなってその後結構長い間光っているかもしれない。

細胞用蛍光顕微鏡での緑色蛍光タンパクの使用感 削除/引用 No.6296-1 - 2017/09/10 (日) 13:39:00 - att 研究室では、培養室の細胞用顕微鏡に 蛍光フィルターキューブ（オリンパスU-FGFP；励起460-480、吸収495-540） とCoolLED-pe300というレーザーがついています。 細胞にloxp-flanked、GFPタグ付きタンパクを発現させて、Cre発現処理をして後からGFPで消失を確認したい、というのが目的です。 そこで、緑色蛍光蛋白に何を使うか迷っています。 使用経験ないのですが、mCloverやライセンスが許せばneonGreenが新しくて明るいGFPだと思うのですが、GFP、EGFPより、em,exとも波長が、特に励起が500nm前後なので、返って暗くなるんじゃないかと、心配しています。 このような環境での、使用感はどうなのか、詳しい方にお聞きしたいです。 他の環境や要件は以下です。 細胞観察するのに、コンフォーカル（有料共通機器）が気軽に使える環境ではないです。 融合タンパクなので、2a使うのも考えてますが、できればモノマーとされる蛍光蛋白が良いです。 同様の配列での、マウス作成やパラフィン固定後の2次染色も検討してますが、いわゆるvariant対応の抗GFP抗体で、mcloverとか良好に認識されるでしょうか？ （添付資料的にはするらしいですが、マウスYFPの2次染色がかなり困難だった苦い記憶があります。） ZsGreenとかなら、専用抗体ありですが、前述の通り多量体は避けたいところです。

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