Bio Technical フォーラム

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PEG-maleimide redox トピック削除
No.6268-TOPIC - 2017/09/01 (金) 16:22:51 - あ
PEG-maleimideを用いた実験をしています。
実験の際に、そのポジコンとして予め酸化型にしたタンパク質に還元剤処理をしたのちにPEG-maleimideを反応させているのですが、western blottingで検出するとバンドの行方が分からなくなります。
原因として、試薬の除去中に消失していることも考えられましたがその可能性はほぼなくなりました。
考えられる理由とその改善策がありましたら教えてください。
　
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(無題) 削除/引用
No.6268-4 - 2017/09/01 (金) 18:54:30 - mon
ある程度の量の精製タンパクを用いていると思うので、western blottingではなく銀染色等でも見えませんか？あるいはイオン交換クロマトとか。
要はWBで見えないだけで、物はある、あるいは泳動度が予想より小さくなった（高分子側に偏った。runningゲルに入らない等）とかの可能性は？

(無題) 削除/引用
No.6268-3 - 2017/09/01 (金) 18:17:12 - あい
monさん
それはないと思います。

(無題) 削除/引用
No.6268-2 - 2017/09/01 (金) 17:46:14 - mon
PEG修飾された部位が抗体のepitope（あるいはその近傍）という可能性はありませんか？

PEG-maleimide redox 削除/引用
No.6268-1 - 2017/09/01 (金) 16:22:51 - あ
PEG-maleimideを用いた実験をしています。
実験の際に、そのポジコンとして予め酸化型にしたタンパク質に還元剤処理をしたのちにPEG-maleimideを反応させているのですが、western blottingで検出するとバンドの行方が分からなくなります。
原因として、試薬の除去中に消失していることも考えられましたがその可能性はほぼなくなりました。
考えられる理由とその改善策がありましたら教えてください。
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