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(無題) 削除/引用 No.6263-5 - 2017/09/02 (土) 07:53:11 - m 18度で培養する方法が良いです。 出来立てで10の8乗が目標。ー80度保存。（液体窒素を買う金ありません。） 7乗以下は数ヶ月でダメになります。 ライゲーションはタカラのキット。 インサート1 ul, ベクター0.5 ul, 試薬1.5 ulでやってます。

(無題) 削除/引用 No.6263-4 - 2017/08/31 (木) 17:28:19 - AP どこかのテクニカルチップの論文だったか記事だったかで、手抜き形質転換法が紹介されていて、 スモールスケールのO/NカルチャーにCaCl2だったかを加えただけの菌液にライゲーション産物やプラスミドを入れるというのがあった。形質転換効率はかなり低かったと思うがサブクローニングくらいならそれでもいけるってこと。

(無題) 削除/引用 No.6263-3 - 2017/08/31 (木) 17:24:31 - AP 作った直後で10^8 cfu/ug　くらい それをディープフリーザーで保存したもので、時には数年たったものを普段は使っているので１，２ケタオチだと思う。 作った直後で10^6は低いかもしれないけれど使えないレベルじゃないだろう。 形質転換効率を調べるときは、プラスミド量が多過ぎるとcfuとの線形性が無くなる（プラスミドを増やしたほどにはコロニーが増えない）ので、1 ng以下のプラスミドでみるのがいいと思う。

(無題) 削除/引用 No.6263-2 - 2017/08/31 (木) 15:26:06 - おお 10^6〜10^７ 昔ながらのフラグメントをプラスミドにライゲーションしてという作業なら、10^6ぐらいならよほど難しいもの出ない限り許容範囲。もちろん高ければ高いほうがいいです。

コンピテントセルのCFUについて 削除/引用 No.6263-1 - 2017/08/31 (木) 13:32:39 - CFU コンピテントセルを自作してみてCFUを計算したところ、5 x 10^6 cfu/μgでした。皆さんは普段どれくらいのCFUのコンピテントセルを使っていますか？

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