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(無題) 削除/引用 No.6239-7 - 2017/08/29 (火) 03:35:10 - そも 以前NETsのICCをしていた時に行っていた方法ですが、 24-well plateとかに丸いカバースリップを沈めて、そこで刺激・固定をしていました。 洗浄の仕方は、15-mL tubeスタンドにパラフィルムを貼ってくぼみを作り、そこにWash bufferなどのドロップを作り、カバースリップをドロップに浮かべるようにしていました。Permeabilizationや染色もこれでできます。 見れるかわかりませんが洗浄の様子が動画で紹介されています。 //www.jove.com/video/1724/neutrophil-extracellular-traps-how-to-generate-and-visualize-them

(無題) 削除/引用 No.6239-6 - 2017/08/24 (木) 21:05:18 - nak >　PDさん 有難うございます。 色々な製品があるんですね。調べてみましたが、チャンバー付きスライドのラインナップもあるようですから検討してみます。

(無題) 削除/引用 No.6239-5 - 2017/08/24 (木) 17:14:39 - PD チャンバースライドでなくてもよいのなら、ibidiのu-slideはwashで剥がれにくくきれいに観察できました。

(無題) 削除/引用 No.6239-4 - 2017/08/24 (木) 15:09:20 - nak >　培養細胞初心者さん 有難うございます。 固定して、染色してからスライドグラスに貼り付けるということですか？ 固定後の細胞はうまく貼りつくものなのでしょうか？ それともサイトスピンみたいなものを用いるのでしょうか。 >　Trackerさん PLLコーティングや松浪のMASコーティングのものは使ってみたのですが、一度コラーゲンコーティングは試してみる価値がありそうですね。 有難うございます。 液をあえて少し残してwashするというのも一回試してみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.6239-3 - 2017/08/23 (水) 23:33:55 - Tracker 洗浄の過程で、液をすべて除いて次の液を入れるよりも、wellの隅に少し溜まるくらい残してやると、次に添加する液の流れ(勢い？)がマイルドになって多少なりマシになります。 あとはスライド表面にコラーゲンやPLLなどの基質をコートするのはダメですか？

(無題) 削除/引用 No.6239-2 - 2017/08/23 (水) 22:55:52 - 培養細胞初心者 染色してからスライドに貼り付ける方法があります。

細胞が剥がれにくいwashの仕方 削除/引用 No.6239-1 - 2017/08/23 (水) 21:01:16 - nak 細胞の蛍光免疫染色を行う実験において、培養、固定後の細胞が剥がれるのを少しでも減らす技を教えていただきたく、投稿させていただきました。 チャンバーつきスライドグラス内で好中球を各種の条件で刺激して数時間後〜翌朝にPFA固定して染色して観察するという実験を行っています。 刺激の入った好中球は接着因子が働くのでしょう、よく観察できるのですが、刺激を入れない、あるいは抑制をかけた好中球はwashの過程でパラパラと剥がれて行ってしまい、困っています。 少量ずつゆっくりとwash液を壁に添わせて入れる、スライドグラスは傾けない、など気を付けて行っているのですが他にもいろいろな技があったらぜひとも教えていただければ嬉しいです。 どうかよろしくお願い申し上げます。

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