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アセチル化タンパク質のウェスタンブロットでの検出 トピック削除
No.6216-TOPIC - 2017/08/17 (木) 12:56:31 - あしお
標記の通り、ある特定の酵素についてアセチル化されている状態での発現量をウェスタンブロットにて定量したいと考えております。サンプルは肝S9画分です。

参考論文のメソッドは簡潔で、Anti-acetyl Lysine抗体で検出したとだけ書いてありましたが、この場合目的の酵素だけを検出することは難しいかと存じます。(分子量で推測することは可能かもしれませんが)
また、本酵素はp53のようにアセチル化状態を検出する抗体は市販されていないようです。
このような場合、どのようにすればアセチル化酵素を定量できるでしょうか。

浅学ゆえ至らない質問で申し訳ございませんがご教示いただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.6216-4 - 2017/08/19 (土) 18:31:17 - 乙
だまされたと思ってニコチンアミドとトリコスタチンは入れた方がいい。何でかは調べてください。

(無題) 削除/引用
No.6216-3 - 2017/08/17 (木) 17:16:12 - あしお
AP様 早速のご返答ありがとうございます。
たしかにIPで精製すれば可能ですね、助かりました。

また、アセチル化タンパク質をウェスタンブロットで解析する際の作業上の特殊な点等ご存知の方がいらっしゃいましたらご教示いただければ幸いです。

(無題) 削除/引用
No.6216-2 - 2017/08/17 (木) 12:59:43 - AP
その酵素に対する抗体でIPしてanti-KでWBする。

アセチル化タンパク質のウェスタンブロットでの検出 削除/引用
No.6216-1 - 2017/08/17 (木) 12:56:31 - あしお
標記の通り、ある特定の酵素についてアセチル化されている状態での発現量をウェスタンブロットにて定量したいと考えております。サンプルは肝S9画分です。

参考論文のメソッドは簡潔で、Anti-acetyl Lysine抗体で検出したとだけ書いてありましたが、この場合目的の酵素だけを検出することは難しいかと存じます。(分子量で推測することは可能かもしれませんが)
また、本酵素はp53のようにアセチル化状態を検出する抗体は市販されていないようです。
このような場合、どのようにすればアセチル化酵素を定量できるでしょうか。

浅学ゆえ至らない質問で申し訳ございませんがご教示いただければ幸いです。

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