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遠心上清の上手な除き方 トピック削除
No.6194-TOPIC - 2017/08/08 (火) 16:09:53 - qaz
エタノール沈殿によりタンパク質を抽出しているのですが
抽出量がもともと微量であるため、出来るだけロスを
少なくしたいと考えています。

特に、遠心後の上清を除去する操作に不安を感じています。

タンパク質沈殿物がほとんど目視で確認できない中で、
どのように上清を取り除くのがよいか、コツ等を教えてください。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.6194-4 - 2017/08/09 (水) 16:57:56 - qaz
コメントいただきありがとうございました。

アドバイスに従って操作しましたところ、
うまく上清を除去することができました。
収率もこれまでよりかなり改善されたように思います。

ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.6194-3 - 2017/08/08 (火) 17:20:18 - ANO
追加すると、

 平底チューブの方が、丸底チューブよりも、遠心外側の底の角で沈殿物が集まる場所が判りやすい、

って宣伝しているメーカーもありました。

(無題) 削除/引用
No.6194-2 - 2017/08/08 (火) 16:47:36 - mon
マイクロチューブか15mLチューブ等で多少注意点は異なりますし、swingかangleローターかでも異なります(以下はangleローターを想定)。
(1)沈殿が出来る方向を意識して(マイクロチューブならタブを遠心時外側に向ける、遠心チューブならラベルを内側にする)、上清を吸い取るときに沈殿があると思われる部位を触らない。沈殿があると思われる部位をマークしてもよい。
(2)水面ギリギリから上清を優しく吸い上げる
(3)上清が残り少なくなったら(壁面の沈殿が露出する程度)、チューブを傾けて(沈殿が柔らければ下向き、しっかりしていれば上向きになるように)、垂れてきた上清を吸い上げる。
(4)上清が残り少なくなったら、吸い上げるためのピペットやチップのサイズを小さくしていく(吸い上げるスピードを遅くする)。
(5))上清が残り少なくなったら、必要に応じ再度遠心して沈殿をパックする。

遠心上清の上手な除き方 削除/引用
No.6194-1 - 2017/08/08 (火) 16:09:53 - qaz
エタノール沈殿によりタンパク質を抽出しているのですが
抽出量がもともと微量であるため、出来るだけロスを
少なくしたいと考えています。

特に、遠心後の上清を除去する操作に不安を感じています。

タンパク質沈殿物がほとんど目視で確認できない中で、
どのように上清を取り除くのがよいか、コツ等を教えてください。

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