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(無題) 削除/引用 No.6188-4 - 2017/08/07 (月) 03:13:01 - おお その薬剤の培地中での安定性はどうですか？処理後初期にmRNAが下がるということはないでしょうか？その後蛋白が減るけど、阻害効果が弱くなりmRNAが上がってくるとか。その場合はもう少し処理を続けると蛋白も上がるかな。 くわえて内部標準のRNAが変動している可能性も考えてみてもいいかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.6188-3 - 2017/08/06 (日) 15:54:21 - おお qPCRは数箇所違うところを認識するプライマーセットで確認しましたでしょうか。そのプロモーターが阻害されてもなにか違うプロモーターが下流にあって、そこから転写が始まっているが、開始コドンより下流だから蛋白ができないとか、あるいは、反対側の鎖になにか他の遺伝子がコードされていてその転写産物を見ているとか。

(無題) 削除/引用 No.6188-2 - 2017/08/06 (日) 10:00:39 - Tracker 転写を特異的に阻害ってアンチセンス核酸ですか？ そうだとしたら、アンチセンス核酸によって生じたimmatureなmRNAを定量してしまっている可能性は？ これはqPCRのプライマーを設計する位置に依ります。 あとノックアウトでmRNAレベルとタンパクレベルが「低い」というのはどういうことでしょうか。 ノックダウンのまちがい？

タンパク質とメッセージの挙動の逆相関について。 削除/引用 No.6188-1 - 2017/08/06 (日) 09:44:57 - でもくん おはようございます。 ある薬剤を細胞に処理しました。その細胞（293T）からタンパク質およびmRNAを回収し、それぞれウエスタンやqPCRを行いました。 予想通り薬剤処理により目的のタンパク質Xは低下していたのですが、XのmRNAは軽度に2倍ほど増加していました。以上のことから、代償機構やフィードバックが起こったものと考えられますが、実はその化合物はXのmRNAの転写を阻害する特異的な薬剤なんです。Xのノックアウト293T細胞ではXのmRNAおよびタンパク質いずれも低いです。 もちろんXの阻害標的が一つとは限らないのですが、もしこれが本当にXのmRNA阻害のみの作用しかないとしたら。。非常に解釈に困っています。経験豊富な皆様のコメントをお聞かせいただけますと幸いに存じます。 どうか宜しく御願い致します。

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