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(無題) 削除/引用 No.6136-5 - 2017/07/19 (水) 16:52:16 - 名無し AP様＞ 有難うございます。 これまでに、別サンプル（等密度勾配遠心分離前のWhole lysate、C2C12のWhole lysate）を用いて抗体は標的を認識すること、 また、同じ実験を複数回行って同様の結果が出たことから、 今回見られた点はノイズではないと考えております。 おお様＞ 大変貴重なご指摘を有難うございます。 分子量は他のサンプルでみられる大きさと変わらないため、 おお様の仰る通り、凝集している訳ではないかもしれません。 ご助言に従いまして、希釈したものを流し、条件検討を行ってみたいと思います。 み様＞ 有難うございます。 ポジコンにTotal lysateを加え、原因を追究したいと思います。 ご指摘を大変感謝致します。

(無題) 削除/引用 No.6136-4 - 2017/07/19 (水) 15:12:57 - み 密度勾配を経ずに得たtotal lysateをポジコンにして、抗体の評価と流しているサンプルの評価を区別しないとね。

(無題) 削除/引用 No.6136-3 - 2017/07/19 (水) 14:16:20 - おお バンドの形状が点になるのと、凝集しているのは別問題だと思います。凝集してたら分子量が大きく（大抵の場合かなり大きく）見積もられる位置に来ると思います。他の検出しているバンドに比べてかなり分子量が高いとかないでしょうか？バファーや夾雑物の影響でバンドが細くなったり（そういう場合は末広がりだったりして下の方のバンドはマシに見えたりする）、そんなことが関係してそうな気がします。検出にあまり大きな影響がないなら １xSample Bufferで４倍ぐらいに希釈して４分の１量とか流すとどうでしょうか。流れた様子はMembraneに移してからPonceauなどで染めるとわかります。

(無題) 削除/引用 No.6136-2 - 2017/07/19 (水) 14:15:16 - AP その抗体はちゃんと標的を検出できるのだろうか？ そうではなくて、たまたまその辺りにドット状のノイズが見えてるだけの可能性は？

ミトコンドリア分画のWestern blot 削除/引用 No.6136-1 - 2017/07/19 (水) 12:20:04 - 名無し 平素より大変お世話になっております。 マウス骨格筋のミトコンドリアを等密度勾配遠心法にて抽出したあと、 Western blotでミトコンドリア外膜に局在するタンパクの定量を試みています。 しかし、想定されるバンド付近には点のようなものしか検出されず、バンドの形を形成していません。 凝集している可能性を考えて、シリンジを通すなどを行ったのですが、改善が認められない状況です。 しかし、ターゲットとしているタンパク以外は通常のバンドと同じように検出することができます。 原因が全く特定することができず、とても困っています。 もしこれまでに、このようなご経験のある方がいらっしゃいましたら、ご助言を頂戴できないでしょうか。 何卒宜しくお願い致します。

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