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(無題) 削除/引用 No.6109-3 - 2017/07/06 (木) 15:24:42 - おお まずTM領域から伸びる配列の電荷でどちら向きに膜に挿入されるかが決まると考えられています。したがってそういう情報が乱れないかどうかが心配なところです。 従来C末にくるものをN末に持ってくるともう一つ心配なのは、C末端を覆うようにリガンドが付く場合は、N末からTMにつながっているので、ライガンドがうまくアクセスできないかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.6109-2 - 2017/07/06 (木) 13:22:44 - mon 2型膜貫通タンパク質って厄介ですよね。 2型のTMドメインのN側細胞内ドメインが150aa以上あると正常なトポロジーにならないそうです。 なので、細胞内ドメインに大きなタグ(EGFP等）をつけるのはNGです。 どのようなレポーターを考えているのか不明ですが、 N-Xの細胞内ドメイン-XのTMドメイン-Xの細胞外ドメイン-（リンカー）-EGFPやペプチドtag-Cの構成にすれば良いのでは。。IRES-薬剤耐性遺伝子ユニットを載せているなら、より使い良いと思います。

2型膜貫通タンパク質のレポーター細胞の作成について 削除/引用 No.6109-1 - 2017/07/06 (木) 08:29:23 - タンパク質 この度はお世話になります。 2型膜貫通タンパク質Xの細胞外ドメインをクローニングし、それをレポータの膜貫通ドメインと細胞質ドメインに融合させたいです。コンストラクション後、哺乳動物細胞の膜に発現させ、Xのリガンドの同定を行おうとしています。 ここで質問ですが、2型ですと、XのC末側にリガンド結合ドメインが存在し、それを外側にしてどうタンパク質を発現させるか悩んでいます。そのまま、N-（Xの細胞外ドメイン）-TMドメイン-細胞内ドメイン-Cと発現させるとXの細胞外ドメインが細胞外にはでますが、細胞の外向きには出てくれないと思います。 やはり、レポータープラスミドをタイプ2型のものを購入するべきでしょうか？ つまり、N-細胞内ドメイン-TMドメイン-（マルチクローニングサイト。ここへXの細胞外ドメインをクローニング）-Cが穏当でしょうか？ 何かアイデアがありましたらどうかご教授いただけますと幸いです。 ちなみにX細胞外ドメインのFc融合タンパク質は作製しており、それはN-シグナル配列-（Xの細胞外ドメイン）-Fcドメイン-Cで作製しましたが、既知のリガンドとは結合してくれました。

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