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(無題) 削除/引用 No.6078-5 - 2017/07/04 (火) 17:30:29 - Tany 追伸 今回の私のサンプルでは，熱変性をしなくても全く問題ありませんでした． 以上ご報告までに．

(無題) 削除/引用 No.6078-4 - 2017/06/28 (水) 20:06:20 - Tany AP様，toto様 ご回答ありがとうございます． まずは正規プロトコルを信じて変性なしでやってみます． 高次構造が原因と思われる失敗がみられる場合には熱変性をマストにしてみます． 近日中にトライしてみるので，また結果が出ましたら書き込ませていただきます．

(無題) 削除/引用 No.6078-3 - 2017/06/27 (火) 23:43:26 - toto 熱変成はしなくても読める場合が多いですが、inverse repeatなど2次構造を取りやすい配列では加熱した方が良く読める傾向は確かにあります。

(無題) 削除/引用 No.6078-2 - 2017/06/27 (火) 23:00:53 - AP 少なくとも発売以来、以前のメーカー公式のマニュアルでは熱変性処理(ヒートショックと記載されていた)は入っていました。今それが省かれているということは必須ではないということが確立されたんだしょう。私家版のプロトコールで熱変性が入っているのは、昔の公式マニュアルの名残なんでしょう。 X-terminatorが発売された時に、熱変性不要ということで、どういうテクノロジーなんだろうと思いましたが、もともと不必要ってことだったんでしょうね。

シークエンサーにかける前の変性処理 削除/引用 No.6078-1 - 2017/06/27 (火) 19:15:05 - Tany いつもお世話になっております． ちょっとしたことなのですが，気になったことがあり質問させてください． 久しぶりにサイクルシークエンスによるDNA配列の解析を行おうと思い，いろいろとプロトコルを調べています． BigDyeの取扱説明書では，PCR産物の精製後，HiDiに懸濁してそのままシークエンサーにかけるプロトコルとなっています． しかし，複数の研究室から公開されているプロトコルでは，HiDiへの懸濁後に熱変性のステップを加えているものがあります． 私が以前シークエンシングをしていた時には，変性処理をしておらず，それでもきれいに読めていたと記憶しています． そこで質問なのですが， 1. この熱変性ステップは必須なのでしょうか? 2. 皆様は熱変性をしていますか?またした場合としていない場合の差を感じられた方がいらっしゃいましたら是非教えてください． すみませんが，以上よろしくお願いいたします．

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