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(無題) 削除/引用 No.6067-4 - 2017/06/22 (木) 19:08:29 - q太郎 おお様 ご助言ありがとうございます。 なるほど、こういった手があるのですね。参考にさせていただきます。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.6067-3 - 2017/06/22 (木) 02:20:46 - おお http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X03014050?via%3Dihub あ、Pro-MMP9はゼラチンザイモグラフィーでアクティブなんですね。上記のようにマチュレーションに必要な因子をCo-transfectionしたりするのも手かもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.6067-2 - 2017/06/22 (木) 02:09:02 - おお ＞上澄みをゼラチンザイモグラフィーで確認したのですが、HeLa細胞とHT-1080細胞、A549細胞では、inactive MMP9のバンドしか検出されませんでした。 教えていただきたいのですが、ゼラチンザイモグラフィーで活性のないMMPがどのように検出できるのでしょうか？この領域に詳しくないので不思議に思いました。

細胞培養液中に active MMP9 を生産させる方法 削除/引用 No.6067-1 - 2017/06/21 (水) 22:04:57 - q太郎 いつも勉強させていただいています。標記の件に関してご存知の方がいれば、ご教示いただければ幸いです。 現在、培養細胞を用いて、細胞培養液上澄み中に active MMP9 を分泌させる、または分泌した inactive MMP9 (pro MMP9) を active MMP9 に活性化させたいと考えています。 既に、Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) で刺激したがん細胞を培養した上澄みをゼラチンザイモグラフィーで確認したのですが、HeLa細胞とHT-1080細胞、A549細胞では、inactive MMP9のバンドしか検出されませんでした。 細胞培養液上澄みを有機水銀化合物とインキュベートすると、inactive MMP9 を active MMP9 にできるようですが、細胞が固定化されているデッシュ中で active MMP9を生産させたいので、細胞が生存する方法でactive MMP9を生産させる方法をご存知の方がいれば、ご助言よろしくお願い致します。 よろしくお願いします。

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