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(無題) 削除/引用 No.6052-3 - 2017/06/15 (木) 14:16:49 - 非特異的な人間 SDS-PAGEの原理を復習すると、確かに高次構造を検出しないような処理をしてますね。勉強になりました。 非特異的ではなく、特異的なバンドと考えればよいのですね。 オーバーロードすると、複数のバンドが検出される場合もある点があるんですね。 なぜそうなるのか、理由が気になりました。

(無題) 削除/引用 No.6052-2 - 2017/06/15 (木) 12:17:18 - おお 多分特異的なバンドでしょう。SDS-PAGEの原理を復習してください。高次構造が検出できるかどうかよく考えてみてください。移動度が変わる原因は他にもいっぱいあります。例えば短くなっちゃったら小さいものが検出されますよね。コバレントに何かくっついたらどうですか？加えて電荷によって蛋白が流れているわけですよね。 またもしオーバーロードならシングルバンドで出るはずのものが、複数になったりすることはあります。

FLAG-cDNAを導入した細胞のWBで非特異的なバンドがでる 削除/引用 No.6052-1 - 2017/06/15 (木) 11:43:40 - 非特異的な人間 すみません、ウエスタンブロットの結果で質問させて下さい。 FLAGタグを付けたcDNA発現ベクターを培養細胞にトランスフェクトしてWBをしました。 FLAG抗体で検出した結果、目的のサイズのバンドがでたのですが、それ以外にもサイズの異なるバンドが2本(目的のサイズより高いバンドと低いバンド)現れました。 No transfectの細胞や、FLAG-emptyをtransfectした細胞では、これらのバンドが全く出てきませんでした。 この２本の非特異的なバンドが何なのかわかりません。 目的のタンパク質が高次構造を作って、サイズの異なるバンドがでてくるものなのでしょうか？ どのように解釈してよいかわからないので、質問しました。

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