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(無題) 削除/引用 No.6043-9 - 2017/06/16 (金) 07:04:58 - ほ やる気を削ぐような名前の蛋白質ですね。

(無題) 削除/引用 No.6043-8 - 2017/06/15 (木) 07:23:43 - おお HydrophobinっていうCys Richな蛋白があって、溶けにくいらしいからそういう蛋白をどのように扱っているか調べてみたら。うわさによるとSDSでボイルしても溶けないらしい。。。

(無題) 削除/引用 No.6043-7 - 2017/06/13 (火) 23:13:03 - mon まずは、以下の点を明らかにしてください。それによって対処法が異なります。 勝手にNative細胞内タンパクと思っていましたが、異なるかもしれませんね。 (1)目的タンパクが、細胞内タンパク・細胞外タンパク（分泌？）・膜タンパクのどれなのか。 (2)目的タンパク調製法は、異種（大量）発現系なのか。それなら目的タンパクの由来と宿主について。あるいはNativeタンパクなのか。

(無題) 削除/引用 No.6043-6 - 2017/06/13 (火) 22:40:27 - p システインが多いことが不溶化の本当の原因かどうかわからないけど、仮にそうならば、市販のprotein dislfide isomeraseを使ってin vitroで可溶化する方法はある。詳細はpotein dislfide isomeraseとリフォールディングで検索すれば見つかる。

(無題) 削除/引用 No.6043-5 - 2017/06/12 (月) 12:02:42 - nnn 目的タンパク質は何からとってきているんでしょうか？ 大量発現系を用いている場合、細胞内で正しいフォールディングをとっていない可能性があります。 特に今回の場合、システインが豊富にあるわけですから、正しくフォールドさせるのは容易ではないです。 目的タンパク質に合った発現系を探すのが良いのでは？

(無題) 削除/引用 No.6043-4 - 2017/06/11 (日) 14:13:32 - mon http://www.dojindo.co.jp/technical/protocol/p34.pdf

(無題) 削除/引用 No.6043-3 - 2017/06/11 (日) 14:08:25 - mon ＞目的タンパク質はシステインが非常に多く 細胞内タンパクでFreeのシステインが多いのでしょうか？還元剤添加でも酸化されやすいのですか？ 細胞外タンパクでS-S結合しているのなら高次構造は丈夫ですが。

(無題) 削除/引用 No.6043-2 - 2017/06/11 (日) 14:04:09 - mon 効果的な可溶化剤はタンパクによって異なります。万能なものは有りませんので試行錯誤が必要です。また、可溶化剤によって変性するか否かもタンパクによって異なります。 とりあえずの基礎知識は以下 http://dominoweb.dojindo.co.jp/goodsr7.nsf/ByChuInfo/03?OpenDocument

タンパク質の可溶化 削除/引用 No.6043-1 - 2017/06/11 (日) 13:47:12 - みーる 現在タンパク質精製を行っています。 目的タンパク質はシステインが非常に多く可溶化がうまくいかず、ペレットに目的タンパク質がいってしまいます。 タンパク質を変性させてはいけないのでn-Octyl-β-D-glucosideを使用しています。 タンパク質が変性せずに効果的な可溶化剤はありませんか？

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