Bio Technical フォーラム

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ヒト血液からのRNA抽出 トピック削除
No.6017-TOPIC - 2017/06/04 (日) 23:56:43 - こうすけ
ヒト血液からのRNA抽出→リアルタイムPCRの実験を予定しています。
RNAの抽出がうまくいかず困っております。
手順は、採血→採血管に保存→数日4度で保管、もしくはすぐに抽出作業、で行っております。RNA抽出キットとしてタカラバイオの抽出キット、キアゲンの抽出キット（50μ用の血液専用ではないキット）を用いてみましたが収量が少なく（ほとんど抽出できていない）、困っております。

経験のある方で、手順や抽出キット、収量がどのくらいあるものなのかなどお教えください
　
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(無題) 削除/引用
No.6017-3 - 2017/06/05 (月) 14:30:41 - ~
抽出キットのメーカーは全血から取れるRNA量の目安を出してますよね。
また、サンプルの保管方法もインストラクションに書いていますよね。

特にサンプルの保管方法がインストラクションとは大きく異なりますので、
それでもできるという根拠が信頼できるものなのかを確認されてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.6017-2 - 2017/06/05 (月) 10:33:13 - おお
血液はあるキットによると採血後数時間以内に精製するのがよいと書かれています。血液は扱ったことがないのでよくわかりませんが４日間の保存で分解されているのではとも思えます。

血液用キットじゃないとRNAは取れないとは思いませんが、どのようなことが起こり得るかなど経験値がないと対処できないこともあるかもしれません。血液のRNA精製に関する文献を色々と見ていくとそういうのがわかるかもしれません。

収量的には１ mlの血液から２、３ ugぐらいかなと

ヒト血液からのRNA抽出 削除/引用
No.6017-1 - 2017/06/04 (日) 23:56:43 - こうすけ
ヒト血液からのRNA抽出→リアルタイムPCRの実験を予定しています。
RNAの抽出がうまくいかず困っております。
手順は、採血→採血管に保存→数日4度で保管、もしくはすぐに抽出作業、で行っております。RNA抽出キットとしてタカラバイオの抽出キット、キアゲンの抽出キット（50μ用の血液専用ではないキット）を用いてみましたが収量が少なく（ほとんど抽出できていない）、困っております。

経験のある方で、手順や抽出キット、収量がどのくらいあるものなのかなどお教えください
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